猪MII期卵母细胞冷冻及体外受精的研究
发布时间：2022-02-17 12:27
卵母细胞的玻璃化冷冻是保护物种资源有效手段,同时也可以为克隆等现代生物技术的研究提供大量的实验材料。由于猪卵母细胞对低温极其敏感,其玻璃化冷冻的研究进展十分缓慢。本实验以猪MⅡ期卵母细胞为研究对象,研究了几种玻璃化冷冻液对卵母细胞的毒性作用及不同冷冻载体、冷冻液对冷冻效果的影响,并通过体外受精对玻璃化冷冻后卵母细胞的发育能力进行检验,以探讨猪卵母细胞在玻璃化冷冻过程中的受损机制及体外受精的影响因素,筛选出较合适的冷冻液组合及载体,为进一步研究奠定基础。本研究主要包括以下主要内容：1.分别采用三种不同的冷冻液组合按照对应冷冻程序处理猪MⅡ期卵母细胞后不经冷冻进行孤雌激活培养,研究不同冷冻液组合对卵母细胞的毒性影响。2.分别采用三种不同的的冷冻液组合按照对应冷冻程序对猪MⅡ期卵母细胞采用GMP法进行冷冻,研究不同冷冻液组合对卵母细胞存活率的影响。3.选择效果最好的冷冻液组合,分别采用GMP和Cryotop为载体对猪MⅡ卵母细胞进行冷冻,研究不同载体对卵母细胞存活率的影响。4.通过FITC-PNA染色研究玻璃化冷冻对卵母细胞皮质颗粒分布的影响。5.分别对猪MⅡ期卵母细胞外卵丘进行不同处理后进...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 卵母细胞在冷冻过程中的损伤机制
1.2 冷冻保存的方法
1.2.1 慢速冷冻法(Slow freezing)
1.2.2 快速冷冻法(Rapid freezing)
1.2.3 超快速冷冻法(Ultra rapid freezing)
1.2.4 玻璃化冷冻(Vitrification)
1.3 玻璃化冷冻的原理
1.3.1 玻璃化冷冻的定义
1.3.2 冷冻保护剂的作用
1.3.3 玻璃化冷冻保护剂的选择
1.3.4 玻璃化冷冻载体的选择
1.4 冷冻对卵母细胞结构的损伤
1.4.1 冷冻对透明带的损伤
1.4.2 冷冻对细胞膜的损伤
1.4.3 冷冻对细胞骨架的损伤
1.5 猪卵母细胞体外受精的研究
1.5.1 体外受精技术的研究进展
1.5.2 卵丘细胞对卵母细胞的作用
1.5.3 卵丘细胞对卵母细胞受精及后期发育能力的影响
1.5.4 精子的体外获能
1.5.5 影响体外受精效果的因素
1.6 本研究的目的与意义
2 材料方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要仪器设备与耗材
2.1.3 主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1 猪卵母细胞体外成熟
2.2.2 猪卵母细胞成熟的外部鉴定
2.2.3 猪卵母细胞的孤雌激活与培养
2.2.4 猪卵母细胞胞质成熟鉴定
2.2.5 猪卵母细胞的冷冻与解冻
2.2.6 猪卵母细胞的存活率检验
2.2.7 猪卵母细胞的体外受精
2.2.8 实验数据分析
2.3 实验设计
2.3.1 不同冷冻液对卵母细胞的毒性影响
2.3.2 不同载体对卵母细胞的冷冻效果的影响
2.3.3 冷冻前后卵母细胞皮质颗粒分布的变化
2.3.4 卵丘细胞对体外受精效果的影响
2.3.5 冷冻对卵母细胞后期发育能力的影响
3 结果与分析
3.1 不同冷冻液组的毒性对卵母细胞的影响
3.2 不同冷冻液对卵母细胞冷冻后存活率的影响
3.3 不同载体冷冻后对细胞存活率的影响
3.4 冷冻对卵母细胞皮质颗粒分布的影响
3.5 卵丘细胞对卵母细胞的体外受精的影响
3.6 冷冻对卵母细胞后期发育能力的影响
4 讨论
4.1 不同冷冻液对卵母细胞的冷冻效果及毒性影响
4.2 不同载体对卵母细胞冷冻效果的影响
4.3 冷冻对卵母细胞皮质颗粒分布的影响
4.4 卵丘细胞对卵母细胞的体外受精的影响
4.5 冷冻对卵母细胞后期发育能力的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]玻璃化冷冻对猪MⅡ卵母细胞皮质颗粒分布及其激活后胚胎发育能力的影响[J]. 郑天威,傅祥伟,吴国权,贾宝瑜,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2012(19)
[2]精液品质及其体内和体外受精能力的相关性研究[J]. 马红,王文涛,付博,何鑫淼,吴赛辉,李忠秋,汪亮,彭福刚,刘娣. 畜牧与兽医. 2012(03)
[3]体外受精技术及其在家畜繁殖中的应用[J]. 刘旗. 农业技术与装备. 2011(15)
[4]卵丘细胞在牛卵母细胞体外受精生产胚胎中的作用[J]. 赵学明,杜卫华,郝海生,王栋,朱化彬. 农业生物技术学报. 2011(02)
[5]体外受精技术的发展和应用[J]. 郭晓强. 生物学教学. 2011(03)
[6]猪人工授精存在的问题及对策[J]. 李颖芳. 畜牧兽医杂志. 2010(04)
[7]卵母细胞冷冻损伤研究现状[J]. 王义鹏,李向臣,苏晓华,曹贵方,关伟军,马月辉. 黑龙江畜牧兽医. 2010(11)
[8]乙二醇及二甲基亚砜对小鼠卵母细胞冷冻后纺锤体及孤雌激活后发育能力的影响[J]. 裴燕,索伦,王亮,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2010(05)
[9]深低温冻存组织工程化软骨在关节软骨缺损修复的应用[J]. 黄建民,陈就好,焦文成,董敏杰,刘志,李军政. 现代生物医学进展. 2009(15)
[10]卵母细胞成熟发生机制的研究进展[J]. 陈涛,曹鸿国,张卫琴,赵桂香,薛奕杰,张育军,章孝荣. 生命科学. 2009(02)
博士论文
[1]猪卵母细胞的超低温冷冻保存及影响其冻后发育能力的机理研究[D]. 武彩红.南京农业大学 2006
硕士论文
[1]猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陆文昊.安徽农业大学 2010
[2]卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及其发育能力的影响[D]. 郝元斌.南京农业大学 2010
[3]牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究[D]. 王义鹏.内蒙古农业大学 2010
[4]猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陶志云.安徽农业大学 2007
[5]猪卵母细胞玻璃化冷冻及体外成熟的研究[D]. 黄晶.西北农林科技大学 2007
本文编号：3629402
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 卵母细胞在冷冻过程中的损伤机制
1.2 冷冻保存的方法
1.2.1 慢速冷冻法(Slow freezing)
1.2.2 快速冷冻法(Rapid freezing)
1.2.3 超快速冷冻法(Ultra rapid freezing)
1.2.4 玻璃化冷冻(Vitrification)
1.3 玻璃化冷冻的原理
1.3.1 玻璃化冷冻的定义
1.3.2 冷冻保护剂的作用
1.3.3 玻璃化冷冻保护剂的选择
1.3.4 玻璃化冷冻载体的选择
1.4 冷冻对卵母细胞结构的损伤
1.4.1 冷冻对透明带的损伤
1.4.2 冷冻对细胞膜的损伤
1.4.3 冷冻对细胞骨架的损伤
1.5 猪卵母细胞体外受精的研究
1.5.1 体外受精技术的研究进展
1.5.2 卵丘细胞对卵母细胞的作用
1.5.3 卵丘细胞对卵母细胞受精及后期发育能力的影响
1.5.4 精子的体外获能
1.5.5 影响体外受精效果的因素
1.6 本研究的目的与意义
2 材料方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要仪器设备与耗材
2.1.3 主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1 猪卵母细胞体外成熟
2.2.2 猪卵母细胞成熟的外部鉴定
2.2.3 猪卵母细胞的孤雌激活与培养
2.2.4 猪卵母细胞胞质成熟鉴定
2.2.5 猪卵母细胞的冷冻与解冻
2.2.6 猪卵母细胞的存活率检验
2.2.7 猪卵母细胞的体外受精
2.2.8 实验数据分析
2.3 实验设计
2.3.1 不同冷冻液对卵母细胞的毒性影响
2.3.2 不同载体对卵母细胞的冷冻效果的影响
2.3.3 冷冻前后卵母细胞皮质颗粒分布的变化
2.3.4 卵丘细胞对体外受精效果的影响
2.3.5 冷冻对卵母细胞后期发育能力的影响
3 结果与分析
3.1 不同冷冻液组的毒性对卵母细胞的影响
3.2 不同冷冻液对卵母细胞冷冻后存活率的影响
3.3 不同载体冷冻后对细胞存活率的影响
3.4 冷冻对卵母细胞皮质颗粒分布的影响
3.5 卵丘细胞对卵母细胞的体外受精的影响
3.6 冷冻对卵母细胞后期发育能力的影响
4 讨论
4.1 不同冷冻液对卵母细胞的冷冻效果及毒性影响
4.2 不同载体对卵母细胞冷冻效果的影响
4.3 冷冻对卵母细胞皮质颗粒分布的影响
4.4 卵丘细胞对卵母细胞的体外受精的影响
4.5 冷冻对卵母细胞后期发育能力的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]玻璃化冷冻对猪MⅡ卵母细胞皮质颗粒分布及其激活后胚胎发育能力的影响[J]. 郑天威,傅祥伟,吴国权,贾宝瑜,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2012(19)
[2]精液品质及其体内和体外受精能力的相关性研究[J]. 马红,王文涛,付博,何鑫淼,吴赛辉,李忠秋,汪亮,彭福刚,刘娣. 畜牧与兽医. 2012(03)
[3]体外受精技术及其在家畜繁殖中的应用[J]. 刘旗. 农业技术与装备. 2011(15)
[4]卵丘细胞在牛卵母细胞体外受精生产胚胎中的作用[J]. 赵学明,杜卫华,郝海生,王栋,朱化彬. 农业生物技术学报. 2011(02)
[5]体外受精技术的发展和应用[J]. 郭晓强. 生物学教学. 2011(03)
[6]猪人工授精存在的问题及对策[J]. 李颖芳. 畜牧兽医杂志. 2010(04)
[7]卵母细胞冷冻损伤研究现状[J]. 王义鹏,李向臣,苏晓华,曹贵方,关伟军,马月辉. 黑龙江畜牧兽医. 2010(11)
[8]乙二醇及二甲基亚砜对小鼠卵母细胞冷冻后纺锤体及孤雌激活后发育能力的影响[J]. 裴燕,索伦,王亮,朱士恩. 中国畜牧杂志. 2010(05)
[9]深低温冻存组织工程化软骨在关节软骨缺损修复的应用[J]. 黄建民,陈就好,焦文成,董敏杰,刘志,李军政. 现代生物医学进展. 2009(15)
[10]卵母细胞成熟发生机制的研究进展[J]. 陈涛,曹鸿国,张卫琴,赵桂香,薛奕杰,张育军,章孝荣. 生命科学. 2009(02)
博士论文
[1]猪卵母细胞的超低温冷冻保存及影响其冻后发育能力的机理研究[D]. 武彩红.南京农业大学 2006
硕士论文
[1]猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陆文昊.安徽农业大学 2010
[2]卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及其发育能力的影响[D]. 郝元斌.南京农业大学 2010
[3]牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究[D]. 王义鹏.内蒙古农业大学 2010
[4]猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻的研究[D]. 陶志云.安徽农业大学 2007
[5]猪卵母细胞玻璃化冷冻及体外成熟的研究[D]. 黄晶.西北农林科技大学 2007
本文编号：3629402
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