cGAS/STING在猪圆环病毒2型感染中的作用研究

发布时间：2022-02-18 14:43

　　猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2,PCV2）是一种单链环状DNA病毒,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）为主的猪圆环病毒病（porcine circovirus associated disease,PCVAD）的关键病原分子（Karuppannan and Opriessnig 2017）。被PCV2感染的猪,可发生免疫抑制,天然免疫应答减弱,对多种病原易感,导致严重的多病原混合感染,病死率高,给养猪业造成了巨大的经济损失。通常,病毒感染机体后会被机体识别并引起相应的免疫应答,cGAS/STING作为一种关键的DNA感受通路,在机体抗病毒免疫反应以及一些炎性因子的分泌过程中发挥重要作用,但是cGAS、STING在PCV2感染机体引起机体免疫抑制的过程中怎样发挥作用目前还没有研究报道。本试验以PK-15细胞作为基因编辑的模式细胞,运用靶向于猪c GAS基因和sting基因的CRISPR-Cas9慢病毒敲除系统感染野生型PK-15细胞,并用适当浓度的嘌呤霉素进行筛选,得到阳性单克隆细胞,经过扩大培养,成功获取了cGAS基因敲除细胞系和sting基... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
文献综述
    第一章 cGAS/STING在抗病毒免疫中的调控作用
        1.1 cGAS/STING通路简介
            1.1.1 cGAS
            1.1.2 STING
            1.1.3 cGAS/STING通路
        1.2 cGAS/STING通路在抗病毒免疫中的作用与调控机制
            1.2.1 cGAS/STING在病毒诱导的I型干扰素产生中的作用
            1.2.2 cGAS/STING对不同病毒复制的影响
        1.3 cGAS/STING通路对PCV2感染的调控作用
            1.3.1 PCV2简介
            1.3.2 PCV2的复制及致病特征
            1.3.3 cGAS/STING通路在抗PCV2感染中的作用
        1.4 本研究的目的和意义
试验研究
    第二章 cGAS、sting基因敲除细胞的构建和鉴定
        2.1 试剂材料
            2.1.1 细胞、质粒
            2.1.2 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂配制
        2.2 方法
            2.2.1 重组目的质粒的构建
            2.2.2 慢病毒包装
            2.2.3 慢病毒滴度测定
            2.2.4 嘌呤霉素最适浓度的确定
            2.2.5 筛选稳定感染的阳性细胞
            2.2.6 慢病毒感染后细胞形态变化及活性检测
            2.2.7 Western Blotting检测
            2.2.8 细胞基因组测序鉴定
        2.3 结果与分析
            2.3.1 cGAS基因和sting基因敲除位点的确定
            2.3.2 双酶切鉴定
            2.3.3 慢病毒滴度测定结果
            2.3.4 慢病毒感染细胞形态及活力变化
            2.3.5 Western blotting检测慢病毒感染细胞的cGAS基因和sting基因敲除情况
            2.3.6 细胞基因组测序
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 cGAS/STING缺失对PCV2感染PK-15 细胞抗病毒免疫的影响
        3.1 试剂材料
            3.1.1 主要试剂
            3.1.2 主要仪器
            3.1.3 试验溶液的配制
        3.2 方法
            3.2.1 PCV2增殖以及滴度测定
            3.2.2 Real-time PCR/ELISA检测IFN-β 的变化
            3.2.3 Realtime PCR/ELISA检测IL-6 分泌的变化
            3.2.4 Realtime PCR/ELISA检测IL-1β 分泌的变化
            3.2.5 cGAS/STING对PCV2复制的影响
            3.2.6 统计分析
        3.3 结果与分析
            3.3.1 PCV2滴度测定结果
            3.3.2 PCV2感染后PK-15 细胞中IFN-β、IL-6、IL-1β 的动力学变化
            3.3.3 cGAS/STING对PCV2感染细胞中IFN-β 表达的影响
            3.3.4 cGAS/STING对PCV2感染细胞中IL-6 表达的影响
            3.3.5 cGAS/STING对PCV2感染细胞中IL-1β 表达的影响
            3.3.6 cGAS/STING对PCV2复制的影响
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论与创新点
参考文献
主要缩略词和中英文对照表（Abbreviation Index）
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型与猪圆环病毒相关性系统疾病的回顾及展望[J]. 顾金燕,邢刚,雷静,刘斐,周继勇.  生物工程学报. 2015(06)
[2]病毒感染引发天然免疫细胞信号转导研究进展[J]. 孙文香,蒋争凡.  中国细胞生物学学报. 2013(05)
[3]STING在宿主天然免疫信号通路中的调节作用[J]. 郑洋,邢雅玲,陈晓娟,杨星星,王凯,陈忠斌.  生物化学与生物物理进展. 2013(01)
[4]细胞内模式识别受体研究进展[J]. 闫鸿斌,高闪电,贾万忠,才学鹏.  免疫学杂志. 2008(03)
[5]最新动物病毒分类简介[J]. 陆承平.  中国病毒学. 2005(06)



本文编号：3631021