稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白的细胞系Vero-SLAM-M的构建

发布时间：2022-02-21 04:52

　　为了建立稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白（M）的细胞系,从犬瘟热病毒狐狸源分离毒株SD16F中扩增出M基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo的Xho I/Not I位点处。重组质粒经PCR、Xho I/Not I双酶切及测序鉴定后转染Vero-SLAM细胞,利用G418抗性压力筛选阳性细胞,并采用RT-PCR及间接免疫荧光试验（IFA）鉴定转染细胞中M蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了重组质粒pCI-neo-M,瞬时及稳定转染Vero-SLAM细胞后,RT-PCR和IFA能够检测到M基因的转录和表达,且G418筛选后细胞与其亲本Vero-SLAM细胞生长特性基本一致,表明获得1株能稳定表达M蛋白的细胞系,命名为Vero-SLAM-M。 

【文章来源】：中国兽医杂志. 2020,56(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒、细胞、犬瘟热病毒及阳性血清
        1.1.2 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 重组质粒 pCI-neo-M 的构建
            1.2.1.1 PCR 扩增
            1.2.1.2 载体的构建与鉴定
        1.2.2 细胞瞬时转染及M基因表达鉴定
            1.2.2.1 细胞转染
            1.2.2.2 RT-PCR 鉴定
            1.2.2.3 间接免疫荧光鉴定
        1.2.3 Vero-SLAM-M 细胞系的构建
            1.2.3.1 细胞G418 筛选浓度的确定
            1.2.3.2 细胞转染及克隆筛选
            1.2.3.3 M 基因转录及蛋白表达水平的检测
            1.2.3.4 细胞生长曲线测定
2 结果
    2.1 pCI-neo-M 表达载体构建
    2.2 M基因的瞬时表达
    2.3 G418 最适浓度测定结果
    2.4 Vero-SLAM-M 细胞系的构建
    2.5 Vero-SLAM-M 细胞系生长曲线
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[3]犬瘟热疫苗研究进展[J]. 周莉,吴亨进,浦同灿,胡尚,罗时霞,贾惠珺,何仕健.  贵州畜牧兽医. 2014(03)
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[7]犬瘟热新型疫苗研究进展[J]. 王磊,李天松,刘玉秀,高玉伟,杨松涛,夏咸柱.  动物医学进展. 2011(03)
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博士论文
[1]犬瘟热病毒强毒株TM-CC反向遗传系统及表达犬细小病毒VP2蛋白重组犬瘟热弱毒株的构建[D]. 李维克.东北林业大学 2014
[2]表达狂犬病病毒G蛋白重组犬瘟热弱毒疫苗株的研究[D]. 王喜军.中国农业科学院 2012



本文编号：3636535