不同品系鸡Gimap5基因的克

发布时间：2022-02-22 01:50

　　GTP酶免疫相关蛋白5（GTPase immune-associated protein 5,Gimap5）参与T细胞稳态调控,在免疫和炎症反应等过程中发挥重要作用,但在鸟类中的功能与特性研究未见报道。本研究以鸡为模式动物,克隆不同品系鸡Gimap5基因全长开放阅读框（ORF）序列及其部分启动子序列,通过生物信息学分析、组织表达鉴定和DNA甲基化功能研究,探索鸡Gimap5基因的功能特性及其启动子甲基化在转录调控过程中的作用。主要研究结果如下:首先,本研究克隆海兰褐蛋鸡、AA⁺肉鸡和三黄肉鸡的Gimap5基因全长开放阅读框序列,并进行序列比对和生物信息学分析。结果表明:三个品系鸡中Gimap5基因ORF序列均为771 bp,编码256个氨基酸,在不同物种间保守性较低。Gimap5蛋白N-末端AIG-1结构域和C-末端跨膜序列α-螺旋结构分别在蛋白功能和细胞定位中可能发挥重要作用。其次,qRT-PCR技术分析Gimap5基因的组织转录表达分布及其在炎症反应和免疫反应中的功能特性。实验结果表明:三个品系鸡中Gimap5在各组织中广泛表达。Gimap5基因表达活性在蛋鸡... 

【文章来源】：哈尔滨师范大学黑龙江省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 Gimap蛋白家族的研究进展
        1.1.1 Gimap家族蛋白结构与细胞定位
        1.1.2 Gimap家族成员与淋巴细胞
        1.1.3 Gimap家族成员与肿瘤
    1.2 Gimap5基因简介
        1.2.1 Gimap5与T细胞稳态调节
        1.2.2 Gimap5与BCL-2 家族蛋白
        1.2.3 Gimap5与炎症
        1.2.4 Gimap5与自身免疫
        1.2.5 Gimap5与造血
        1.2.6 Gimap5与糖尿病
        1.2.7 Gimap5展望
    1.3 启动子对基因的转录调控
        1.3.1 启动子甲基化对基因的调控
        1.3.2 启动子顺式作用元件对基因的调控
        1.3.3 DNA甲基化分析方法
        1.3.4 Gimap5基因启动子研究
    1.4 本研究目的和意义
第2章 不同品系鸡Gimap5基因克隆与序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 菌种与质粒
        2.1.3 酶和生化试剂
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 样品采集
        2.2.2 T-A克隆
        2.2.3 生物信息学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 不同品系鸡Gimap5基因的克隆
        2.3.2 生物信息学分析
    2.4 讨论
        2.4.1 不同品系鸡Gimap5序列对比分析
        2.4.2 不同品系鸡Gimap5基因生物信息学分析
    2.5 本章小结
第3章 不同品系鸡Gimap5基因的时空表达特性分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 酶和生化试剂
        3.1.3 引物
        3.1.4 主要仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 样品采集
        3.2.2 荧光定量PCR分析
        3.2.3 Gimap5基因的时空表达谱分析
        3.2.4 统计分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 扩增曲线和溶解曲线
        3.3.2 相同日龄不同品系雏鸡Gimap5基因表达谱结果
        3.3.3 不同发育阶段海兰褐蛋鸡Gimap5基因的表达谱结果
    3.4 讨论
        3.4.1 不同品系14日龄鸡Gimap5的组织表达特性分析
        3.4.2 不同发育阶段海兰褐蛋鸡Gimap5的组织表达特性分析
    3.5 本章小结
第4章 Gimap5在免疫和炎症反应中的表达特性分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 酶和生化试剂
        4.1.3 引物
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 炎症模型雏鸡的制备和验证
        4.2.2 疫苗免疫模型雏鸡的制备和验证
        4.2.3 样品采集
        4.2.4 炎症模型中Gimap5的表达特性分析
        4.2.5 疫苗免疫模型中Gimap5的表达特性分析
        4.2.6 统计分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 炎症模型中Gimap5的表达特性分析
        4.3.2 疫苗免疫模型中Gimap5的表达特性分析
    4.4 讨论
        4.4.1 炎症模型中Gimap5的表达特性分析
        4.4.2 疫苗免疫模型中Gimap5的表达特性分析
    4.5 本章小结
第5章 不同品系鸡Gimap5基因部分启动子的克隆与甲基化水平分析
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 质粒与菌种
        5.1.3 酶与生化试剂
        5.1.4 引物
        5.1.5 主要设备仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 样品采集
        5.2.2 T-A克隆
        5.2.3 生物信息学分析
        5.2.4 Gimap5基因启动子区甲基化检测
    5.3 结果与分析
        5.3.1 不同品系鸡Gimap5基因启动子测序结果及序列比对
        5.3.2 生物信息学分析
        5.3.3 Gimap5基因启动子区甲基化状态分析
    5.4 讨论
        5.4.1 不同品系鸡Gimap5基因启动子序列比对
        5.4.2 不同品系鸡Gimap5基因启动子序列同源性与进化性分析
        5.4.3 Gimap5基因核心启动子预测
        5.4.4 Gimap5基因转录因子结合位点预测
        5.4.5 Gimap5 基因启动子CpG岛预测及甲基化分析
    5.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]FOXO3相关信号途径影响细胞自噬的研究进展[J]. 黄坚毅,王进,黄燕宁,陈红常.  医学综述. 2019(07)
[2]DNA甲基化的生物信息学研究进展[J]. 凡时财,张学工.  生物化学与生物物理进展. 2009(02)
[3]DNA甲基化方法研究现状[J]. 沈佳尧,侯鹏,祭美菊,李松,陆祖宏,何农跃.  生命的化学. 2003(02)

硕士论文
[1]鸡不同疫苗免疫反应中几个免疫相关基因的表达特性研究[D]. 赵冬雪.哈尔滨师范大学 2017
[2]LPS诱导鸡几个炎症反应相关基因的表达调控研究[D]. 穆卫涛.哈尔滨师范大学 2016
[3]血细胞特异性转录因子SPIB在肺癌转移中的功能研究[D]. 牛卿.天津医科大学 2014



本文编号：3638448