醌氧化还原1与血根碱肝细胞毒相关性及机理的研究
发布时间：2022-02-23 05:54
血根碱是一种天然的异喹啉类生物碱,具有抗菌、促进动物生长及杀虫等作用。但血根碱也存在一定的毒性,例如可以诱导肝细胞毒性。血根碱在体内的消除过程包括氧化代谢和还原代谢途径。研究发现1相代谢酶P450酶系中的CYP1A1和CYP1A2能参与血根碱的氧化；血根碱与不表达CYP450酶的细胞孵育,主要生成二氢血根碱,但参与这一过程的还原代谢酶还没有被发现。NQO1能够以NAD（P）H为电子供体,催化进入体内的醌类化合物的还原反应,属于Ⅱ相解毒酶。NQO1是否能够将血根碱还原为二氢血根碱还没有报道。因为血根碱还原为二氢血根碱的反应也属于双电子还原反应,因此我们推测NQO1可能参与这一反应。应用MTT试验和Hochest33342/PI染色方法对大鼠BRL细胞和大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞的增殖和凋亡进行研究,结果表明：血根碱和二氢血根碱都能够浓度和时间依赖性地抑制HSC-T6细胞和BRL细胞的增殖,且血根碱对细胞的增殖抑制程度显著高于二氢血根碱；血根碱和二氢血根碱都能够浓度和时间依赖性地诱导细胞凋亡,血根碱诱导细胞的凋亡显著高于二氢血根碱。说明血根碱对HSC-T6细胞和BRL细胞的毒性高于二氢...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词对照表
第1章 文献综述
1.1 血根碱研究进展
1.1.1 血根碱的药理作用研究进展
1.1.2 血根碱毒理作用研究进展
1.1.3 血根碱代谢动力学研究进展
1.1.4 血根碱分子调节机制
1.2 NQO1研究进展
1.2.1 NQO1基因的组成与结构
1.2.2 NQO1单核苷酸多态性
1.2.3 NQO1诱导的信号通路研究
1.2.4 NQO1的保护作用
1.3 研究的目的和意义
第2章 血根碱对大鼠HSC-T6和BRL细胞增殖和凋亡的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 SANG和DHSA对HSC-T6细胞活力的影响
2.2.2 SANG和DHSA对HSC-T6细胞凋亡的影响
2.2.3 SANG和DHSA对BRL细胞活力的影响
2.2.4 SANG和DHSA对BRL细胞凋亡的影响
2.3 讨论分析
2.4 小结
第3章 血根碱引起BRL细胞增殖和凋亡的机制研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 血根碱对ROS产生、细胞凋亡、细胞周期以及MMP的影响
3.2.2 血根碱对BCL2和BAX的影响以及BCL2表达下调的机理研究
3.2.3 血根碱对caspase的影响以及caspase与细胞凋亡的关系研究
3.2.4 血根碱诱导的细胞凋亡与ROS及BCL2的关系研究
3.3 讨论分析
3.4 小结
第4章 NQO1和CYP1A1过表达对BRL细胞的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 血根碱对NQO1和CYP1A1表达的影响
4.2.2 NQO1和CYP1A1腺相关病毒载体的构建
4.2.3 腺相关病毒包装和纯化结果
4.2.4 腺相关病毒最适感染复数及基因过表达结果
4.2.5 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染对BRL细胞活力的影响
4.2.6 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染对BRL细胞凋亡的影响
4.2.7 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染对凋亡相关基因表达的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第5章 原核表达NQO1对血根碱代谢作用探讨
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果
5.2.1 pET28a-NQO1原核表达载体的构建
5.2.2 pET28a-NQO1原核表达与蛋白纯化
5.2.3 血根碱与NQO1的体外孵育试验
5.3 讨论分析
5.4 小结
全文总结与创新点
参考文献
附录
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]NQO1基因C609T、C465T多态性与子宫内膜癌易感性的关系[J]. 李利,高会影,杨威威,李方,程建新. 山东医药. 2013(03)
[2]博落回提取物对早期断奶仔猪生长性能和血清免疫参数的影响[J]. 满意,张春勇,李美荃,骆雪,陈克嶙,郭荣富. 动物营养学报. 2013(01)
[3]MPO、NQO1基因多态性与急性白血病易感性的相关研究[J]. 贾明峰,席亚明,石秀娥,张豪,邓伟,李明,李培,徐建旺,马海珍,姚小健. 中国实验血液学杂志. 2012(06)
[4]二氢苯骈[c]菲啶类生物碱的制备及其抗乙肝病毒的活性[J]. 吴颖瑞,方宏,牙始康,何瑞杰. 化学研究. 2012(04)
[5]血根碱对卵巢癌细胞生长及放射敏感性的影响[J]. 徐加英,吉俊敏,焦旸,伍理,樊赛军. 中华放射医学与防护杂志. 2012 (01)
[6]NAD（P）H:醌氧化还原酶1对多巴胺能细胞的保护作用[J]. 王艳,王娜,俞国华,袁崇刚. 中国病理生理杂志. 2011(10)
[7]腺病毒滴度不同测定方法比较[J]. 孙鹏宇,张艳玲,荆玉明,张信基,张哲欢,黎诚耀,陈白虹,谭万龙,李红卫. 南方医科大学学报. 2011(02)
[8]博落回制剂对禽霍乱、仔猪白痢的对比治疗试验[J]. 郁建生. 黑龙江畜牧兽医. 2007(02)
[9]博落回生物碱对八种真菌的抑菌作用研究[J]. 郁建平,赵东亮,孟祥斌,周晓秋. 贵州大学学报(自然科学版). 2006(01)
[10]RP-HPLC法同时测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量[J]. 安彩贤,杨广德,叶建涛,符军梅. 中成药. 2001(11)
本文编号：3641004
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词对照表
第1章 文献综述
1.1 血根碱研究进展
1.1.1 血根碱的药理作用研究进展
1.1.2 血根碱毒理作用研究进展
1.1.3 血根碱代谢动力学研究进展
1.1.4 血根碱分子调节机制
1.2 NQO1研究进展
1.2.1 NQO1基因的组成与结构
1.2.2 NQO1单核苷酸多态性
1.2.3 NQO1诱导的信号通路研究
1.2.4 NQO1的保护作用
1.3 研究的目的和意义
第2章 血根碱对大鼠HSC-T6和BRL细胞增殖和凋亡的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 SANG和DHSA对HSC-T6细胞活力的影响
2.2.2 SANG和DHSA对HSC-T6细胞凋亡的影响
2.2.3 SANG和DHSA对BRL细胞活力的影响
2.2.4 SANG和DHSA对BRL细胞凋亡的影响
2.3 讨论分析
2.4 小结
第3章 血根碱引起BRL细胞增殖和凋亡的机制研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 血根碱对ROS产生、细胞凋亡、细胞周期以及MMP的影响
3.2.2 血根碱对BCL2和BAX的影响以及BCL2表达下调的机理研究
3.2.3 血根碱对caspase的影响以及caspase与细胞凋亡的关系研究
3.2.4 血根碱诱导的细胞凋亡与ROS及BCL2的关系研究
3.3 讨论分析
3.4 小结
第4章 NQO1和CYP1A1过表达对BRL细胞的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 血根碱对NQO1和CYP1A1表达的影响
4.2.2 NQO1和CYP1A1腺相关病毒载体的构建
4.2.3 腺相关病毒包装和纯化结果
4.2.4 腺相关病毒最适感染复数及基因过表达结果
4.2.5 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染对BRL细胞活力的影响
4.2.6 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染对BRL细胞凋亡的影响
4.2.7 rAAV-NQO1和rAAV-CYP1A1感染对凋亡相关基因表达的影响
4.3 讨论
4.4 小结
第5章 原核表达NQO1对血根碱代谢作用探讨
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果
5.2.1 pET28a-NQO1原核表达载体的构建
5.2.2 pET28a-NQO1原核表达与蛋白纯化
5.2.3 血根碱与NQO1的体外孵育试验
5.3 讨论分析
5.4 小结
全文总结与创新点
参考文献
附录
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]NQO1基因C609T、C465T多态性与子宫内膜癌易感性的关系[J]. 李利,高会影,杨威威,李方,程建新. 山东医药. 2013(03)
[2]博落回提取物对早期断奶仔猪生长性能和血清免疫参数的影响[J]. 满意,张春勇,李美荃,骆雪,陈克嶙,郭荣富. 动物营养学报. 2013(01)
[3]MPO、NQO1基因多态性与急性白血病易感性的相关研究[J]. 贾明峰,席亚明,石秀娥,张豪,邓伟,李明,李培,徐建旺,马海珍,姚小健. 中国实验血液学杂志. 2012(06)
[4]二氢苯骈[c]菲啶类生物碱的制备及其抗乙肝病毒的活性[J]. 吴颖瑞,方宏,牙始康,何瑞杰. 化学研究. 2012(04)
[5]血根碱对卵巢癌细胞生长及放射敏感性的影响[J]. 徐加英,吉俊敏,焦旸,伍理,樊赛军. 中华放射医学与防护杂志. 2012 (01)
[6]NAD（P）H:醌氧化还原酶1对多巴胺能细胞的保护作用[J]. 王艳,王娜,俞国华,袁崇刚. 中国病理生理杂志. 2011(10)
[7]腺病毒滴度不同测定方法比较[J]. 孙鹏宇,张艳玲,荆玉明,张信基,张哲欢,黎诚耀,陈白虹,谭万龙,李红卫. 南方医科大学学报. 2011(02)
[8]博落回制剂对禽霍乱、仔猪白痢的对比治疗试验[J]. 郁建生. 黑龙江畜牧兽医. 2007(02)
[9]博落回生物碱对八种真菌的抑菌作用研究[J]. 郁建平,赵东亮,孟祥斌,周晓秋. 贵州大学学报(自然科学版). 2006(01)
[10]RP-HPLC法同时测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量[J]. 安彩贤,杨广德,叶建涛,符军梅. 中成药. 2001(11)
本文编号：3641004
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