干酪乳杆菌菌影作为DNA疫苗包装载体对免疫应答的影响

发布时间：2022-02-26 07:34

　　DNA疫苗与传统疫苗相比,具有明显的优势。但由于DNA为生物大分子,难以被细胞直接摄入,而且核酸容易降解。因此“裸”DNA疫苗难以被抗原提呈细胞摄入、表达及抗原递呈,导致免疫应答水平较低,其推广使用受到限制。细菌菌影（bacterial ghosts,BGs）是裂解细菌细胞壁、去除细胞质内容物之后形成的细菌空壳。它具有完整的天然表面抗原,不仅能直接作为疫苗使用,还可以作为一种良好的载体。本研究利用干酪乳杆菌菌影作为包装载体,分析其对DNA免疫效果的影响。首先,将质粒pCI-EGFP和菌影装载的pCI-EGFP分别与RAW264.7细胞和原代巨噬细胞混匀,未处理的巨噬细胞作为对照,通过荧光显微镜观察。结果显示:质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,只观察到微弱的荧光,而菌影装载质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,可观察到大量绿色荧光,表明EGFP在转染细胞中获得了有效表达。同时,通过流式细胞仪检测转染效率,结果显示:质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,阳性细胞率分别为1.4%和1.8%,而菌影装载质粒转染RAW264.7细胞和原代巨噬细胞后,阳性细胞率分别为7... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 菌影的研究进展
        1.1.1 菌影的制备
        1.1.2 菌影作为黏膜疫苗的研究进展
        1.1.3 菌影作为疫苗佐剂的研究进展
        1.1.4 菌影作为递送系统的研究进展
    1.2 乳酸菌的研究进展
        1.2.1 乳酸菌的益生作用
        1.2.2 乳酸菌作为基因工程菌的研究进展
    1.3 DNA疫苗的研究进展
        1.3.1 DNA疫苗的概述
        1.3.2 DNA疫苗的免疫机制
        1.3.3 DNA疫苗的应用
    1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 菌种
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要试剂
        2.1.6 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 质粒装载干酪乳杆菌菌影
        2.2.2 转染巨噬细胞
        2.2.3 巨噬细胞细胞因子的检测
        2.2.4 小鼠骨髓来源树突细胞的分离和培养
        2.2.5 树突细胞表型检测
        2.2.6 树突细胞细胞因子的检测
        2.2.7 混合淋巴细胞反应试验
        2.2.8 动物试验
3 结果
    3.1 干酪乳杆菌菌影作为DNA疫苗包装载体对转染效率的影响
        3.1.1 荧光显微镜检测巨噬细胞的转染结果
        3.1.2 流式细胞术检测巨噬细胞转染效率的结果
    3.2 转染巨噬细胞后免疫分子的检测结果
        3.2.1 qPCR检测细胞因子的结果
        3.2.2 qPCR检测Toll样受体的结果
    3.3 干酪乳杆菌菌影对树突状细胞的影响
        3.3.1 树突细胞形态观察
        3.3.2 树突细胞纯度的检测结果
        3.3.3 树突细胞表面分子的检测结果
        3.3.4 实时荧光定量PCR检测树突细胞细胞因子的结果
        3.3.5 混合淋巴细胞反应结果
    3.4 动物试验
        3.4.1 血清中特异性抗体水平的检测结果
        3.4.2 脾细胞增殖试验结果
        3.4.3 CD4~+/CD8~+T细胞比例结果
        3.4.4 细胞因子检测结果
4 讨论
    4.1 干酪乳杆菌菌影作为包装载体对DNA疫苗免疫效果的影响
    4.2 干酪乳杆菌菌影作为DNA疫苗包装载体的优势和前景
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]益生素及其在养鸡业中应用的研究进展[J]. 张健,郑世民.  中国畜牧兽医. 2011(02)
[2]DNA疫苗免疫特性及其在动物医学中的应用[J]. 张凤珍,薛江东.  畜牧兽医科技信息. 2010(05)

博士论文
[1]胡椒碱通过调控mTORC1信号增强巨噬细胞固有免疫功能的机制研究[D]. 潘浩.暨南大学 2017
[2]乳酸菌与茶多酚对肉鸡生理生化性能及免疫机能的研究[D]. 李华丽.湖南农业大学 2015



本文编号：3644237