丙酸睾酮对小鼠睾丸BNNF、NGF、NT-3和NT-4神经营养素表达的影响

发布时间：2017-05-14 07:06

  本文关键词：丙酸睾酮对小鼠睾丸BNNF、NGF、NT-3和NT-4神经营养素表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：哺乳动物的繁殖活动除了下丘脑-垂体-性腺轴的激素调控外,也受多种细胞因子的调节,其中包括神经营养素。神经营养素(Neurotrophins)是在神经系统中发现的一类蛋白家族,是神经细胞存活和发育的主要调节因子。神经营养素家族包括神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF),神经营养素3(NT-3)和神经营养素4(NT-4)。它们主要是在脑和神经组织表达,对神经细胞的分化和神经元存活具有重要作用。雄激素主要是由睾丸合成和分泌,与动物生殖有着极其密切的关系,能够影响精子发生。研究发现,神经营养因子和雄激素在动物生殖调控中发挥着重要作用。然而在雄性生殖调控中,雄激素和神经营养素之间的关系并不明确。本文以小鼠为研究对象,探究丙酸睾酮对小鼠睾丸神经营养素表达的影响,以揭示雄激素与神经营养素在雄性生殖中的调节关系,研究内容如下:1、丙酸睾酮对小鼠睾丸神经营养素表达的影响用丙酸睾酮处理小鼠0、6、12和24h后,收集睾丸,观察睾丸形态变化,检测睾丸中神经营养素m RNA和蛋白质的表达变化。小鼠睾丸切片HE染色结果显示,高剂量丙酸睾酮严重破坏了睾丸结构,精子发生出现异常。神经营养素定量结果表明,丙酸睾酮处理小鼠,12小时后发生明显作用,能促进睾丸中BDNF、NT-3和NT-4的表达,而抑制NGF的表达。2、丙酸睾酮对TM4和GC-1spg细胞神经营养素表达的影响。用丙酸睾酮处理TM4和GC-1spg细胞,通过CCK8法检测细胞活力变化,运用荧光定量来检测神经营养素m RNA的变化,利用细胞免疫荧光检测神经营养素蛋白质的表达变化。细胞活力实验结果显示,丙酸睾酮对TM4和GC-1spg细胞活性无明显影响。荧光定量与细胞免疫荧光结果表明,丙酸睾酮处理TM4细胞,使BDNF和NT4的表达在12h降低,到24h又恢复到正常水平,而NGF和NT-3的表达在12h后受到抑制。对于GC-1spg细胞,丙酸睾酮处理使BDNF和NGF的表达在6h到12h降低,24h后表达升高,最终BDNF表达水平高于正常,而NGF表达回到正常水平;NT-3的表达量在6h下降,12h升高,而在24h又下降,出现回复现象,NT-4的表达则在6h后受到了抑制。综上所述,我们的研究结果表明,高剂量的丙酸睾酮会严重破坏睾丸的正常结构,使精子发生异常,出现雄性不育。丙酸睾酮能够调节睾丸中神经营养素的表达,参与调控雄性生殖。
【关键词】：丙酸睾酮 小鼠 睾丸 神经营养素 表达
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S814
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 中英文对照表12-13
• 前言13-15
• 第一篇 文献综述15-27
• 第1章 雄激素与雄性动物生殖15-23
• 1.1 雄激素15
• 1.2 雄激素受体15-17
• 1.3 雄激素与雄性动物生殖17-21
• 1.3.1 雄激素的生物作用17-18
• 1.3.2 睾丸的结构与功能18-20
• 1.3.3 雄激素与雄性生殖20-21
• 1.4 雄激素与神经营养素21
• 1.5 雄激素的应用21-23
• 第2章 神经营养素研究进展23-27
• 2.1 脑源性神经营养因子（BDNF）23-24
• 2.2 神经生长因子(NGF)24-25
• 2.3 神经营养 3（NT-3）和神经营养素 4（NT-4）25-27
• 第二篇 研究内容27-57
• 第1章丙酸睾酮对小鼠睾丸神经营养素表达的影响27-47
• 1.1 材料27-29
• 1.1.1 实验动物27
• 1.1.2 主要实验仪器27-28
• 1.1.3 主要试剂28
• 1.1.4 主要试剂配制28-29
• 1.2 方法29-40
• 1.2.1 实验动物分组及处理29
• 1.2.2 小鼠睾丸组织石蜡切片制备29
• 1.2.3 小鼠睾丸组织HE染色29-30
• 1.2.4 小鼠睾丸总RNA提取及反转录30-31
• 1.2.5 物设计与合成31-32
• 1.2.6 目的基因克隆32-35
• 1.2.7 荧光定量35-36
• 1.2.8 小鼠睾丸总蛋白提取及浓度测定36-37
• 1.2.9 蛋白免疫印迹37-40
• 1.2.10数据统计40
• 1.3 结果分析40-44
• 1.3.1 小鼠睾丸形态变化40-41
• 1.3.2 小鼠睾丸总RNA提取41-42
• 1.3.3 目的基因扩增及测序42
• 1.3.4 小鼠睾丸神经营养素mRNA表达42-43
• 1.3.5 小鼠睾丸神经营养素蛋白表达43-44
• 1.4 讨论44-46
• 1.5 小结46-47
• 第2章 丙酸睾酮对TM3、TM4及GC-1spg细胞神经营养素表达的影响47-57
• 2.1 材料47-48
• 2.1.1 实验材料47
• 2.1.2 主要仪器47
• 2.1.3 主要试剂47
• 2.1.4 主要试剂配制47-48
• 2.2 方法48-49
• 2.2.1 细胞培养及处理48
• 2.2.2 CCK8测细胞活力48-49
• 2.2.3 细胞免疫荧光49
• 2.2.4 RNA提取与反转录、目的基因扩增及测序和荧光定量49
• 2.2.5 数据统计49
• 2.3 结果分析49-54
• 2.3.1 丙酸睾酮对TM4和GC-1spg细胞活力的影响49-50
• 2.3.2 TM4和GC-1spg细胞神经营养素蛋白表达50
• 2.3.3 丙酸睾酮对TM4和GC-1spg细胞神经营养素mRNA表达的影响50-52
• 2.3.4 丙酸睾酮对TM4和GC-1spg细胞神经营养素蛋白表达的影响52-54
• 2.4 讨论54-56
• 2.5 小结56-57
• 结论57-58
• 参考文献58-70
• 导师简介70-71
• 作者简介71-72
• 攻读学位期间发表论文及科研成果72-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 常青;王丽梅;黑常春;蔡玉芳;吴凯;孔斌;朱万平;沈新生;赵承军;;双氢睾酮调节原代培养大鼠Sertoli细胞GDNF的表达[J];基础医学与临床;2015年11期

2 李江源;;精子发生的内分泌激素调节[J];生殖医学杂志;2014年09期

3 黄瑞;朱伟杰;;睾丸支持细胞连接结构在精子发生过程的作用[J];生殖与避孕;2013年03期

4 周晓东;宋小骏;袁力;;神经生长因子对精子活动力的影响[J];医学研究生学报;2012年04期

5 何红云;邓仪昊;杨新文;杨开明;;葛根素减轻乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡[J];基础医学与临床;2009年12期

6 李亚;王伦安;吴泰相;;雄激素受体基因CAG重复多态性与男性不育关系的Meta分析[J];中华男科学杂志;2009年09期

7 甄景波;李文平;李华健;左岩;修贺明;;单侧睾丸扭转对生殖细胞凋亡及黄芪保护作用的实验研究[J];现代泌尿外科杂志;2009年05期

8 章劲夫;桂亚平;胡佳华;;乙醇导致小鼠生精细胞慢性损伤与FasL表达的关系[J];细胞生物学杂志;2009年04期

9 沈美玲;;人类生精细胞凋亡的调控因素[J];山东医学高等专科学校学报;2009年03期

10 李冬梅;孙慧萍;阎赋琴;;神经生长因子药效学研究[J];中国实验动物学报;2008年02期

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本文编号：364480