牛副流感病毒3型全基因组测序及反向遗传质粒系统建立

发布时间：2017-05-14 16:18

  本文关键词：牛副流感病毒3型全基因组测序及反向遗传质粒系统建立，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza-3 virus,BPIV3)隶属于副黏病毒科呼吸道病毒属。BPIV3是牛呼吸道综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)的主要病原,大多数牛感染BPIV3会表现出急性临床症状,对舍饲育肥牛的危害极大,全球的养牛业因此蒙受重大的经济损失。截至目前,BPIV3已报道3种基因型,即A、B及C型,在世界范围内的多个地区均有这3种基因型毒株的分离报道。对我国BPIV3流行病学调查表明,该病毒已在我国广泛流行,黑龙江、山东和内蒙古自治区等地亦有该病毒的分离报道,已进行基因鉴定毒株的基因型主要为A型及C型。本研究对2014年分离于宁夏地区的一株BPIV3毒株进行全基因组测序并进行同源性及进化树分析,参考GenBank上标准序列设计5对引物,覆盖病毒基因组全长。将RT-PCR产物连接于pMD#174;18-T载体后转化至大肠埃希菌,将阳性质粒进行核苷酸测序,测序结果通过分子生物学软件进行拼接,并与GenBank上参考序列进行比较及构建进化树。结果表明,分离毒株为C基因型牛副流感病毒3型,命名为NX49。NX49株全基因组长为15474bp,提交到GenBank的序列号为KT071671。理化分析结果表明,NX49毒株对高温、酸及脂溶剂均敏感,高温孵育下Mg2+对该病毒无保护力;血凝实验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1∶4,且仅在4℃孵育时出现凝集反应;第6代病毒的滴度约为108.0TCID50/m L。同源性分析结果表明,NX49与中国山东C型分离株SD0835具有最高的同源性,为99.3%;与中国内蒙古A型分离株NM09的同源性为82.5%;与澳大利亚B型分离株Q5592的同源性为81.4%。NX49与SD0835同属一个进化分枝,但由于地域及时间上的不同可能造成他们之间在基因水平上存在差异。另外,本研究以BPIV3标准毒株BN-1为亲本构建BPIV3反向遗传质粒系统,利用RT-PCR方法分段扩增BPIV3全基因组序列,利用合适的酶切位点将各片段克隆至真核表达载体pCI-neo并分别在病毒基因组的3始

本文编号：365656