TRIM28蛋白调控猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导细胞自噬的分子机制

发布时间：2022-02-26 21:44

　　猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染引起的严重危害全球养猪业重要的病毒性传染病之一。PRRSV感染的靶细胞主要为肺泡巨噬细胞等免疫细胞,常导致动物机体发生免疫抑制,并促进其他病原的共感染。因此,深入研究PRRSV的致病机制对于研发新型疫苗和抗病毒药物具有重要意义。近年来对RPRSV的致病机理进行了多方面的深入研究,但对于该病毒与宿主细胞之间的相互作用机制以及病毒免疫逃逸机制尚不完全清楚。最新的研究发现PRRSV感染可以显著诱导细胞发生自噬,并能促进自身复制,但却未能解释具体的分子调控机制。TRIM28又称KAP1,是TRIM家族的成员之一。已知TRIM28是一个具有多种生物学功能的核蛋白,具有转录抑制因子活性和E3连接酶活性。最新的研究表明,TRIM28还能参与调节病毒复制和细胞自噬发生。但TRIM28是否在PRRSV感染过程发挥作用尚未有报道。利用Marc145细胞系为模型,我们发现PRRSV感染诱导细胞自噬产生时,可显著增加细胞浆提取物中TRIM28（KAP1）的蛋白水平,但却不影响TRIM28的mRNA表达。进一步利用免疫荧光和胞核胞质分离实... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
1 前言
    1.1 猪繁殖与呼吸综合症
        1.1.1 猪繁殖与呼吸综合症概述
        1.1.2 PRRSV的分类与遗传变异
        1.1.3 PRRSV的结构及功能
        1.1.4 PRRSV的致病机制
    1.2 TRIM28 蛋白的结构与功能
        1.2.1 TRIM28 的结构
        1.2.2 TRIM28 的功能与调控
    1.3 研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 质粒、病毒和细胞
        2.1.2 主要试剂及抗体
        2.1.3 设备仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 重组质粒的构建
        2.2.2 感受态细胞制备
        2.2.3 质粒的小量提取
        2.2.4 细胞的培养、冻存与复苏
        2.2.5 病毒的扩增、纯化及TCID_(50)的测定
        2.2.6 真核细胞转染
        2.2.7 蛋白样品的制备
        2.2.8 蛋白浓度测定(BCA法)
        2.2.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳
        2.2.10 免疫印迹
        2.2.11 间接免疫荧光
        2.2.12 胞核胞质分离
        2.2.13 TRIM28 RNA干扰
        2.2.14 细胞总RNA的提取与反转录
        2.2.15 实时荧光定量PCR
        2.2.16 免疫共沉淀
        2.2.17 数据统计分析
3 结果与分析
    3.1 TRIM28 表达促进细胞自噬发生
    3.2 PRRSV感染上调TRIM28 蛋白表达
    3.3 PRRSV感染导致TRIM28 蛋白从细胞核转移到细胞浆
    3.4 PRRSV非结构蛋白Nsp4 是导致TRIM28 出核的关键病毒蛋白
    3.5 PRRSV诱导TRIM28 出核依赖CRMI
    3.6 TRIM28 促进PRRSV诱导的自噬
    3.7 TRIM28 促进Vps34和Beclin1 相互作用
    3.8 TRIM28 促进了Vps34的SUMO化修饰
    3.9 TRIM28 抑制PRRSV的复制
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况



本文编号：3645033