肌肉生长抑制素促绵羊生长制剂的研究

发布时间：2022-04-19 19:20

　　肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN），又称GDF-8（growth differentiationfactor8），是体内广泛存在的一种糖蛋白，属于转化生长β（transforming growthfactor β, TGF-β）超家族，是骨骼肌生长和发育的负调控因子，主要作用是抑制成肌细胞的增生与分化。研究发现，在小鼠体内注射MSTN抗体可以增加骨骼肌的量，并使小鼠肌肉萎缩症状明显改善。在鸡受精卵中注射MSTN抗体，结果发现鸡的体重增加，表明通过制备肌肉生长抑制素的拮抗物来阻断其分子作用通路，可以有效的促进动物肌肉的生长和发育，为改善肉类品质开辟了一条新途径。因此，本研究以抑制绵羊肌肉生长抑制素的功能为出发点，通过抗体技术制备MSTN多克隆抗体和纳米抗体两种途径，探究一条促进绵羊（肌肉）生长的途径，为制备有效的促绵羊生长制剂奠定基础。本文的主要研究内容如下:1.克隆MSTN成熟肽基因，制备MSTN多克隆抗体并对其安全性和效果进行检测验证：利用PCR克隆MSTN成熟肽基因，构建原核表达载体，获得纯化的目的蛋白，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，将其侵染绵羊肌肉细胞并通过检测LD... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
目录
前言
第一章 文献综述
    1 MSTN 基因的发现
    2 MSTN 的结构与功能
    3 MSTN 基因的定位和同源性分析
    4 MSTN 的蛋白结构
    5 MSTN 基因的表达
    6 MSTN 的生物学功能
    7 MSTN 基因的作用机制
    8 MSTN 在畜牧中的应用研究
    9 MSTN 的应用前景
第二章 实验研究
    实验一原核表达载体 pET-32a-MSTN 的构建与表达
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 MSTN 成熟肽基因的克隆
            2.2 重组质粒的鉴定
            2.3 重组表达载体 pET32a-MSTN 的构建与鉴定
            2.4 MSTN 成熟肽蛋白的原核表达
            2.5 目的蛋白表达条件优化
            2.6 MSTN 成熟肽蛋白的纯化和 Western-blotting 分析
        3 讨论
    实验二 MSTN 多克隆抗体的制备与效果验证
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 MSTN 多克隆抗体的 ELISA 检测
            2.2 毒性试验细胞形态观察
            2.3 细胞因子 LDH 水平检测
            2.4 MSTN 抗体对羔羊生长的影响
        3 讨论
第三章 MSTN 单域重链抗体噬菌体文库的构建与鉴定
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.0 抗体效价的检测
        2.1 RNA 的提取与分析
        2.2 VHH 基因的获得
        2.3 pCANTAB-5E 载体与 VHH 连接转化
        2.4 文库的鉴定
    3 讨论
        3.1 重链抗体可变区基因的克隆
        3.2 抗体库的容量
第四章 试验结论
创新点
参考文献
致谢
作者简介及发表文章
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄鱼肌肉生长抑制素基因原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 董海阳,叶秀丽,薛良义,Diallo Amadou.  台湾海峡. 2011(02)
[2]大口黑鲈肌肉生长抑制素多克隆抗体的制备及其对仔鱼生长影响[J]. 张宁宁,白俊杰,李胜杰,叶星,何小平,夏仕玲,杜晓东.  生物技术通报. 2009(12)
[3]牛肌肉生成抑制素基因原核表达及其功能的初步研究[J]. 倪宏波,宋丽,崔玉东,邵红,李冬野,王喆.  中国预防兽医学报. 2008(08)
[4]肌肉生长抑制素（MSTN）基因的研究进展[J]. 张增荣,朱庆.  黑龙江畜牧兽医. 2007(01)
[5]猪Myostatin同源重组载体的构建[J]. 潘求真,陆泉枝,孙书锋,王海,连正兴,杨宁,谭景和,吴常信.  黑龙江畜牧兽医. 2006(10)
[6]不同品种马肌肉抑制素基因的克隆与PCR-RFLP多态性分析[J]. 王全喜,红海,芒来.  中国草食动物. 2005(04)
[7]Cloning and expression of swine myostatin gene and its application in animal immunization trial[J]. MA Xianyong, CAO Yongchang, SHU Dingming & BI Yingzuo Genetic Engineering Laboratory, College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China.  Science in China（Series C:Life Sciences）. 2005(04)
[8]重组肌肉抑制素功能分析及其对鸡肌肉发育的抑制作用[J]. 杨威,王琨,陈岩,张勇,黄波,朱大海.  生物化学与生物物理学报. 2003(11)
[9]绵羊和山羊抑肌素基因的基因组结构和序列分析[J]. 潘求真,陈慧勇,连正兴,李宁,吴常信.  自然科学进展. 2003(01)
[10]噬菌体抗体库技术的研究进展[J]. 刘怀田,王海涛,黄策.  军事医学科学院院刊. 1997(01)



本文编号：3646485