油酸人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备

发布时间：2022-07-02 10:15

　　为建立奶牛血清中油酸（OA）含量的免疫学检测方法,将油酸用活泼酯法分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）进行偶联,制备人工抗原和包被原;利用薄层色谱法（TLC）和红外光谱法鉴定人工抗原合成是否成功;用OA-BSA常规免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行亚克隆;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Hi Trap Protein G HP纯化柱纯化腹水,并对纯化后的腹水用ELISA检测抗体效价,以及抗体亚型鉴定。结果表明,TLC监测抗原合成过程中有新物质生成,红外图谱显示OA-BSA波谱形态与BSA相似且拥有OA的特征峰;小鼠血清抗体效价为1∶12 800,用ELISA方法筛选出1株细胞G-1,抗体亚型为Ig G1型。为建立油酸的免疫学检测方法奠定了基础。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 实验动物
    1.3 主要仪器
    1.4 油酸完全抗原的合成
    1.5 薄层色谱法（TLC）鉴定
    1.6 红外光谱法鉴定
    1.7 小鼠免疫
    1.8 杂交瘤细胞的筛选和建株
    1.9 单克隆抗体的制备
    1.1 0 腹水的纯化
    1.1 1 单克隆抗体亚型的鉴定
2 结果
    2.1 薄层色谱法鉴定
    2.2 红外光谱法鉴定
    2.3 小鼠血清抗体效价的测定
    2.4 杂交瘤细胞的筛选和建株
    2.5 单克隆抗体亚型的鉴定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[2]邻苯二甲酸酯类半抗原的设计合成与抗原制备[J]. 刘媛媛,陈奇娜,徐光辉,张亚安,李壹.  精细化工. 2018(03)
[3]呋喃西林代谢物半抗原的制备及其免疫检测中的应用[J]. 李斌,俞思明,胡睿,于淑娟.  现代食品科技. 2018(03)
[4]奶牛脂肪肝的诊断及监测[J]. 郝宁,邹苏萍,陶焕青,明鹏飞,徐怡钟,聂星灿,冯士彬,王希春,吴金节,李玉.  生物学杂志. 2018(01)
[5]拟除虫菊酯类农药通用人工抗原合成及免疫原性鉴定[J]. 王东方,刘爽,付骋宇,赵吉建,祁志军.  农药. 2015(07)
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[7]反式脂肪酸中反式油酸多克隆抗体的制备[J]. 李昊,王芬.  中国食品学报. 2013(06)
[8]顺丁烯二酸二异辛酯合成新方法[J]. 许友.  湖南理工学院学报(自然科学版). 2010(02)

博士论文
[1]动物性食品中喹噁啉类药物代谢物和磺胺类—喹诺酮类药物多残留免疫分析方法研究[D]. 蒋文晓.中国农业大学 2014

硕士论文
[1]胭脂红单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[D]. 王兴.扬州大学 2016
[2]淀粉糖化酶抗体的研制及其双抗夹心ELISA法的初步建立与应用[D]. 张丹.扬州大学 2012



本文编号：3654180