宿主波形蛋白在禽网状内皮组织增生病病毒感染中的作用机制研究
发布时间：2022-07-02 16:50
禽网状内皮组织增生病（Reticuloendotheliosis,RE）是严重危害养禽业的传染性肿瘤病之一,也是重要的免疫抑制病。禽网状内皮组织增生病病毒（Reticuloendotheliosisvirus,REV）感染主要造成网状内皮细胞增生,诱发机体免疫抑制和矮小综合征等,同时REV能污染马立克氏病病毒疫苗、禽痘病毒疫苗等生物制品,从而降低疫苗的免疫效果。目前,REV常和马立克氏病病毒、白血病病毒、传染性贫血病病毒、传染性法氏囊病病毒等禽的免疫抑制性病毒混合感染,使疾病的发生更为严重,且有加重趋势。随着我国养殖业的集约化发展,REV感染造成的损失已经严重影响了养禽业的经济效益,所以,有必要对REV感染及致病机制进行深入研究。目前,对REV的研究主要局限在基因组的插入整合、混合感染、疫苗污染等方面,但病毒编码蛋白的功能及其在感染和致病过程中与宿主蛋白之间相互作用等方面的研究鲜有报道,有待于开展。病毒与宿主相互作用在病毒感染过程中发挥重要作用,研究REV与宿主相互作用有助于了解病毒的复制机制。在本实验室的前期研究中,采用蛋白质组学方法并结合双向电泳技术,获得了REV感染SPF鸡的脾脏...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 网状内皮组织增生病病毒
1.1.1 病原学
1.1.2 流行病学
1.1.3 临床症状与病理变化
1.1.4 免疫抑制
1.1.5 鉴别诊断
1.1.6 防治
1.2 宿主波形蛋白（vimentin）研究进展
1.2.1 Vimentin蛋白分子结构
1.2.2 Vimentin蛋白的分子生物学功能
1.2.3 Vimentin与病毒相互作用研究进展
1.3 本研究的目的和意义
第二章 REV感染对宿主波形蛋白表达的影响
摘要
2.1 材料和方法
2.1.1 病毒、细胞、抗体、质粒和试剂
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 引物设计与合成
2.1.4 REV复壮与鉴定
2.1.5 鸡源Vimentin基因的克隆与分析
2.1.6 Vimentin Real time PCR的建立
2.1.7 Vimentin在鸡组织中的分布检测
2.1.8 REV感染对vimentin表达的影响
2.2 结果
2.2.1 REV的复壮与鉴定
2.2.2 鸡源vimentin基因的克隆与序列分析
2.2.3 鸡源vimentin基因Real time PCR的建立
2.2.4 波形蛋白vimentin在鸡组织中的分布
2.2.5 REV感染上调vimentin的表达
2.3 讨论
第三章 宿主波形蛋白对REV复制影响的研究
摘要
3.1 材料和方法
3.1.1 病毒、细胞、抗体、试剂
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 引物设计与合成
3.1.4 靶向vimentin的siRNA筛选
3.1.5 Vimentin下调表达对REV复制的影响
3.1.6 Acrylamide对CEF细胞活性的影响
3.1.7 破坏vimentin结构对REV复制的影响
3.2 结果
3.2.1 靶向vimentin的有效siRNA的筛选
3.2.2 下调vimentin的表达抑制REV复制
3.2.3 Acrylamide对CEF细胞活性的影响
3.2.4 抑制vimentin功能抑制REV的复制
3.3 讨论
第四章 宿主波形蛋白影响REV复制的机制研究
摘要
4.1 材料和方法
4.1.1 细胞、抗体、试剂
4.1.2 主要仪器设备
4.1.3 引物设计与合成
4.1.4 REV PR蛋白原核表达
4.1.5 REV PR切割活性的鉴定
4.1.6 REV PR对vimentin原核蛋白的切割活性分析
4.1.7 PR对vimentin真核蛋白的切割活性分析
4.1.8 PR对细胞中vimentin分布的影响
4.1.9 REV感染对细胞中vimentin分布的影响
4.2 结果
4.2.1 REV PR和p18-p30蛋白的原核表达及纯化
4.2.2 PR切割活性的鉴定
4.2.3 PR酶活性最佳反应条件的优化
4.2.4 PR切割vimentin原核表达蛋白
4.2.5 PR DTG基序影响切割vimentin蛋白
4.2.6 PR活性功能区域的确定
4.2.7 PR切割vimentin真核表达蛋白
4.2.8 PR蛋白影响细胞中vimentin的分布
4.2.9 REV感染影响vimentin蛋白的分布
4.3 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[2]肉种鸡肿瘤病料中MDV、REV和CAV共感染的检测[J]. 颜赟,刁有祥,吴焕荣,李建侠,孙杰. 中国兽医学报. 2010(08)
[3]我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测[J]. 秦立廷,高玉龙,潘伟,邓小芸,孙芬芬,李凯,祁小乐,高宏雷,刘超男,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2010(02)
[4]Time course of expression of intermediate filament protein vimentin,nestin and desmin in rat renal glomerular injury[J]. Eishin Yaoita,Yutaka Yoshida,Masaaki Nameta,Tadashi Yamamoto. Chinese Medical Journal. 2007(13)
[5]不同感染量REV对鸡免疫反应和细胞毒性作用的影响[J]. 郭慧君,崔治中,孙淑红,柳风祥. 畜牧兽医学报. 2006(09)
[6]从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒[J]. 张志,崔治中,姜世金. 中国兽医学报. 2004(01)
[7]SPF雏鸡感染REV后免疫器官免疫功能的动态变化[J]. 李广兴,杨丽萍,杨贵君,刘忠贵. 中国兽医学报. 2000(04)
[8]禽网状内皮组织增殖病的组织病理学和超微结构的动态变化[J]. 郁晓岚,徐福南,蔡宝祥,陈溥言. 南京农业大学学报. 1989(02)
[9]禽网状内皮组织增殖病病毒的分离鉴定[J]. 何宏虎,陈溥言,蔡宝祥. 中国畜禽传染病. 1988(02)
博士论文
[1]网状内皮组织增生症病毒LAMP检测方法及感染性分子克隆的建立[D]. 邓小芸.东北农业大学 2011
硕士论文
[1]2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立克活疫苗中污染的检测[D]. 曾婷婷.广西大学 2012
本文编号：3654721
【文章页数】：70 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 网状内皮组织增生病病毒
1.1.1 病原学
1.1.2 流行病学
1.1.3 临床症状与病理变化
1.1.4 免疫抑制
1.1.5 鉴别诊断
1.1.6 防治
1.2 宿主波形蛋白（vimentin）研究进展
1.2.1 Vimentin蛋白分子结构
1.2.2 Vimentin蛋白的分子生物学功能
1.2.3 Vimentin与病毒相互作用研究进展
1.3 本研究的目的和意义
第二章 REV感染对宿主波形蛋白表达的影响
摘要
2.1 材料和方法
2.1.1 病毒、细胞、抗体、质粒和试剂
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 引物设计与合成
2.1.4 REV复壮与鉴定
2.1.5 鸡源Vimentin基因的克隆与分析
2.1.6 Vimentin Real time PCR的建立
2.1.7 Vimentin在鸡组织中的分布检测
2.1.8 REV感染对vimentin表达的影响
2.2 结果
2.2.1 REV的复壮与鉴定
2.2.2 鸡源vimentin基因的克隆与序列分析
2.2.3 鸡源vimentin基因Real time PCR的建立
2.2.4 波形蛋白vimentin在鸡组织中的分布
2.2.5 REV感染上调vimentin的表达
2.3 讨论
第三章 宿主波形蛋白对REV复制影响的研究
摘要
3.1 材料和方法
3.1.1 病毒、细胞、抗体、试剂
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 引物设计与合成
3.1.4 靶向vimentin的siRNA筛选
3.1.5 Vimentin下调表达对REV复制的影响
3.1.6 Acrylamide对CEF细胞活性的影响
3.1.7 破坏vimentin结构对REV复制的影响
3.2 结果
3.2.1 靶向vimentin的有效siRNA的筛选
3.2.2 下调vimentin的表达抑制REV复制
3.2.3 Acrylamide对CEF细胞活性的影响
3.2.4 抑制vimentin功能抑制REV的复制
3.3 讨论
第四章 宿主波形蛋白影响REV复制的机制研究
摘要
4.1 材料和方法
4.1.1 细胞、抗体、试剂
4.1.2 主要仪器设备
4.1.3 引物设计与合成
4.1.4 REV PR蛋白原核表达
4.1.5 REV PR切割活性的鉴定
4.1.6 REV PR对vimentin原核蛋白的切割活性分析
4.1.7 PR对vimentin真核蛋白的切割活性分析
4.1.8 PR对细胞中vimentin分布的影响
4.1.9 REV感染对细胞中vimentin分布的影响
4.2 结果
4.2.1 REV PR和p18-p30蛋白的原核表达及纯化
4.2.2 PR切割活性的鉴定
4.2.3 PR酶活性最佳反应条件的优化
4.2.4 PR切割vimentin原核表达蛋白
4.2.5 PR DTG基序影响切割vimentin蛋白
4.2.6 PR活性功能区域的确定
4.2.7 PR切割vimentin真核表达蛋白
4.2.8 PR蛋白影响细胞中vimentin的分布
4.2.9 REV感染影响vimentin蛋白的分布
4.3 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[2]肉种鸡肿瘤病料中MDV、REV和CAV共感染的检测[J]. 颜赟,刁有祥,吴焕荣,李建侠,孙杰. 中国兽医学报. 2010(08)
[3]我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测[J]. 秦立廷,高玉龙,潘伟,邓小芸,孙芬芬,李凯,祁小乐,高宏雷,刘超男,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2010(02)
[4]Time course of expression of intermediate filament protein vimentin,nestin and desmin in rat renal glomerular injury[J]. Eishin Yaoita,Yutaka Yoshida,Masaaki Nameta,Tadashi Yamamoto. Chinese Medical Journal. 2007(13)
[5]不同感染量REV对鸡免疫反应和细胞毒性作用的影响[J]. 郭慧君,崔治中,孙淑红,柳风祥. 畜牧兽医学报. 2006(09)
[6]从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒[J]. 张志,崔治中,姜世金. 中国兽医学报. 2004(01)
[7]SPF雏鸡感染REV后免疫器官免疫功能的动态变化[J]. 李广兴,杨丽萍,杨贵君,刘忠贵. 中国兽医学报. 2000(04)
[8]禽网状内皮组织增殖病的组织病理学和超微结构的动态变化[J]. 郁晓岚,徐福南,蔡宝祥,陈溥言. 南京农业大学学报. 1989(02)
[9]禽网状内皮组织增殖病病毒的分离鉴定[J]. 何宏虎,陈溥言,蔡宝祥. 中国畜禽传染病. 1988(02)
博士论文
[1]网状内皮组织增生症病毒LAMP检测方法及感染性分子克隆的建立[D]. 邓小芸.东北农业大学 2011
硕士论文
[1]2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立克活疫苗中污染的检测[D]. 曾婷婷.广西大学 2012
本文编号：3654721
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3654721.html
