甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子Ⅱ受体介导PEDV感染作用的初步验证

发布时间：2022-07-07 08:50

　　为进一步研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染细胞的机制,本研究利用病毒铺覆蛋白印迹技术（VOPBA）和质谱（MS）技术筛选细胞内与PEDV相互作用的蛋白,初步鉴定细胞内源性蛋白甘露糖-6-磷酸/胰岛素样生长因子II受体（M6P/IGF2R）为候选蛋白。结果证实M6P/IGF2R蛋白与PEDV S2蛋白相互作用且在细胞内存在共定位现象,过表达M6P/IGF2R能够促进PEDV增殖,干扰M6P/IGF2R能够抑制PEDV增殖。PEDV S2蛋白通过与宿主细胞M6P/IGF2R蛋白互作促进PEDV侵入细胞,该结论为进一步开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用机制研究提供了重要理论依据。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒、细胞和质粒
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA)
        1.2.2 重组质粒构建
        1.2.3 Western blot
        1.2.4 siRNA干扰试验
        1.2.5 激光共聚焦试验
        1.2.6 病毒吸附试验
        1.2.7 统计学分析
2 结果与分析
    2.1 VOPBA筛选受体相关蛋白
    2.2 Western blot分析M6P/IGF2R1～3表达情况
    2.3 siRNA干扰M6P/IGF2R表达
    2.4 激光共聚焦显微镜观察M6P/IGF2R与PEDV在细胞中表达共定位
    2.5 M6P/IGF2R对病毒吸附的影响
        2.5.1 过表达M6P/IGF2R促进PEDV吸附Vero E6细胞
        2.5.2 干扰M6P/IGF2R抑制PEDV吸附IPEC-J2细胞
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪肠道冠状病毒与入侵受体氨基肽酶N的相互作用[J]. 刘炎,黄耀伟.  中国生物化学与分子生物学报. 2019(09)
[2]1株猪流行性腹泻病毒S基因的克隆及序列分析[J]. 周如月,刘琪,甘振磊,贾爱卿,王贵平.  中国兽医学报. 2017(12)

博士论文
[1]猪流行性腹泻病毒纤突蛋白在病毒入侵和免疫反应中的作用研究[D]. 孙彦刚.吉林大学 2019
[2]猪流行性腹泻病毒血清学与抑制病毒入侵细胞的研究[D]. 雷喜梅.浙江大学 2018
[3]登革Ⅱ型病毒EDⅢ与登革病毒受体蛋白的鉴定及功能评价[D]. 杨永红.南方医科大学 2014
[4]甘露糖-6-磷酸受体在恶性肿瘤免疫治疗联合化疗中的作用[D]. 黄纯.天津医科大学 2012

硕士论文
[1]趋化因子在猪流行性腹泻病毒感染中的作用[D]. 孙立旦.河北农业大学 2018
[2]猪流行性腹泻病毒S基因在昆虫细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D]. 杨德强.中国农业科学院 2017
[3]猪整合素αvβ3真核表达载体构建及介导PEDV感染作用的初步验证[D]. 高晶.黑龙江八一农垦大学 2016



本文编号：3656116