禽偏肺病毒mRNA甲基转移酶缺陷弱毒疫苗株的研究

发布时间：2022-07-11 14:39

　　禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus,aMPV）,又称火鸡鼻气管炎病毒（Turkey rhinotracheitis virus, TRTV）,早期称为禽肺病毒（Avian pneumovirus, APV）,该病毒最早于1978年从南非发病火鸡中分离得到,之后在世界范围内蔓延传播。aMPV是副粘病毒科、肺病毒亚科、偏肺病毒属成员,有囊膜,属单节段负链RNA病毒。病毒mRNA的加工处理对病毒基因的表达与病毒基因组的复制至关重要,mRNA的加工处理过程包括加帽、甲基化和聚腺苷酸化。其中加帽和甲基化对mRNA的稳定、翻译及基因表达最为重要,这些加工过程需要一系列的酶促反应,AMPV复制过程中的上述一系列酶促反应均由其L蛋白负责完成。对于单股负链R.NA病毒而言,其L蛋白包括六个高度保守的功能域,分别为CRⅠ、CRⅡ、CRⅢ、 CRIV、 CRV和CRVI功能域。单股负链RNA病毒具有独特的mRNA甲基化机制。生物信息学分析显示,aMPV L蛋白CRVI功能域具有guanine-N-7 （G-N-7）和ribose2’-O（2’-O）甲基转移酶催化活性,这两个甲基转移酶活性... 

【文章页数】：155 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 文献综述
    1. 禽偏肺病毒分类地位
    2. 流行病学及临床特征
    3. 诊断学研究
    4. 禽偏肺病毒基因组结构及蛋白特性
        4.1 核蛋白(nucleocapsid protein,N)
        4.2 磷蛋白(phosphoprotein,P)
        4.3 基质蛋白(matrix protein,M)
        4.4 融合蛋白(fusion protein,F)
        4.5 糖蛋白(glycoprotein,G)
        4.6 小疏水蛋白(small hydrophobic protein,SH)
        4.7 基质蛋白M2
        4.8 大多聚酶蛋白(large subunit of the Polymerase,L)
    5. 禽偏肺病毒的复制及侵染机制
    6. 禽偏肺病毒反向遗传学研究
    7. 禽偏肺病毒的RNA甲基化酶的功能位点研究
    8. 禽偏肺病毒的控制及疫苗研发
        8.1 疫苗的研发
        8.2 疾病的治疗与控制
    9. 本研究的意义
第二部分 研究内容
    第一章 禽偏肺病毒mRNA甲基化过程RNA结合位点生物信息学分析
        摘要
        1. 引言
        2. 生物学软件的应用与分析
        3. 单节段负链(NNS)RNA病毒L蛋白第Ⅵ功能域序列分析
        4. 结果
    第二章 禽偏肺病毒科罗拉多株(aMPV/CO)突变体病毒的拯救及特性分析
        摘要
        1. 引言
        2. 材料和方法
            2.1 病毒、细胞、载体和分子生物学试剂
            2.2 质粒突变体pCITE-L的构建及鉴定
            2.3 小基因组试验(minigenome assay)
            2.4 质粒突变体paMPV/CO的构建及鉴定
            2.5 禽偏肺病毒突变株的拯救
            2.6 逆转录PCR(RT-PCR)及测序鉴定
            2.7 禽偏肺病毒突变株生长特性分析
            2.8 禽偏肺病毒突变株甲基化研究
        3. 结果
            3.1 质粒突变体pCITE-L的构建及鉴定
            3.2 小基因组试验对L蛋白突变体的功能鉴定
            3.3 质粒突变体pBR322的构建及鉴定
            3.4 禽偏肺病毒突变株的拯救和鉴定
            3.5 重组病毒噬斑大小测定
            3.6 重组病毒复制能力测定
            3.7 重组禽偏肺病毒Guanine-N-7位点甲基化研究
            3.8 重组禽偏肺病毒2'-O位点甲基化研究
        4. 讨论
    第三章 禽偏肺病毒甲基转移酶缺陷株致病性研究
        摘要
        1. 引言
        2. 材料与方法
            2.1 实验动物
            2.2 病毒和细胞生物学试剂
            2.3 重组禽偏肺病毒对火鸡致病性的研究
        3. 结果
            3.1 火鸡临床症状观察
            3.2 鼻窦,气管及肺脏病毒滴度及毒基因组RNA的检测
            3.3 组织学研究
        4. 讨论
    第四章 禽偏肺病毒甲基转移酶缺陷株免疫原性研究
        摘要
        1. 引言
        2. 材料与方法
            2.1 试验动物
            2.2 病毒和细胞生物学试剂
            2.3 重组禽偏肺病毒对火鸡免疫原性的研究
        3. 结果
            3.1 症状观察
            3.2 血清中和抗体检测
        4. 讨论
    第五章 结论与展望
        1. 结论
        2. 研究展望
            2.1 研究甲基转移酶缺陷型raMPV疫苗的遗传学稳定性
            2.2 优化甲基转移酶缺陷型raMPV候选疫苗的免疫策略
            2.3 评估甲基转移酶缺陷型raMPV疫苗的交叉保护
            2.4 研究甲基转移酶缺陷型raMPV毒株引发保护性免疫应答的机制
            2.5 提高甲基转移酶缺陷型raMPV疫苗的产率
            2.6 利用甲基转移酶缺陷型raMPV作为载体传递其他人类副粘病毒抗原
            2.7 甲基转移酶催化位点和RNA结合位点携带突变的raMPV毒株拯救和鉴定
参考文献
主要名词缩写
作者简介
攻读博士期间的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]洋葱根端分生组织细胞核中RNA多聚酶Ⅱ转录位置的研究[J]. 胡波,邢苗.  实验生物学报. 1999(02)



本文编号：3658348