CVI988/Rispens疫苗对MDV四川NC株的免疫保护的研究

发布时间：2022-07-13 13:43

　　马立克病（MD）是由α-疱疹病毒科的马立克病毒（MDV）引起鸡死亡的高度传染性肿瘤病,以淋巴组织的增生和肿瘤形成为特征,外周神经、性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤发生单核细胞浸润为主。针对国内爆发现状,马立克病已被认为是禽传染病中最严重的疾病之一。疫苗防控是本病的关键,近年来常有免疫鸡群发生马立克的报道。四川某经CVI988/Rispens疫苗免疫后鸡群爆发马立克病,发病率和死亡率高达30%和20%。进行MDV的分离鉴定,评价现有疫苗株对临床分离株的免疫保护效果,对我国MDV的防治有重要的参考意义。本试验从该鸡场分离到一株适应DEF生长的马立克病毒（MDV NC株）。对Meq基因测序分析,观察病毒的遗传变异；通过免疫保护实验观察CVI988/Rispens和HVT疫苗对NC株的保护效果。结果表明：Meq氨基酸分别在71、80、115、139、176位的突变符合国内强毒MDV的突变特点。HVT疫苗组攻毒后31d开始发病,发病率为40%,死亡率为6.9%,肿瘤发生率为6.9%,对鸡只的保护指数为58；CVI988/Rispens组发病率为51.7%,31d出现死亡,死亡高峰期为攻毒后41-... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
第一部分 文献综述及选题的目的意义
    1. 马立克病的研究进展
        1.1 病原学概述
            1.1.1 MDV分类与血清型
            1.1.2 MDV形态与理化性质
        1.2 MDV的基因组
            1.2.1 MDV基因组结构
            1.2.2 MDV的相关致病基因
        1.3 MDV发病机理
            1.3.1 早期溶细胞阶段
            1.3.2 潜伏感染
            1.3.3 第二次溶细胞性感染期
            1.3.4 转化,肿瘤形成期
        1.4 MD流行病学
        1.5 临床症状和病理变化
            1.5.1 神经型
            1.5.2 内脏型
            1.5.3 眼型
            1.5.4 皮肤型
        1.6 诊断技术
            1.6.1 病毒分离
            1.6.2 血清学实验
            1.6.3 聚合酶链式反应(PCR)
            1.6.4 DNA探针诊断
            1.6.5 实时荧光定量
        1.7 防控
            1.7.1 疫苗防控
            1.7.2 疫苗失败原因
            1.7.3 抗病育种
    2 研究的目的意义
第二部分 实验研究
    1. 材料
        1.1 病毒
        1.2 SPF鸡、鸡胚、鸭胚
        1.3 载体与受体菌
        1.4 主要试剂
        1.5 主要仪器设备
        1.6 试剂配制
        1.7 引物设计
    2. 方法
        2.1 病料检测
            2.1.1 病料来源
            2.1.2 淋巴细胞分离
            2.1.3 外周淋巴细胞总DNA提取
            2.1.4 样品PCR检测
        2.2 病毒分离与鉴定
            2.2.1 鸭胚成纤维细胞制备
            2.2.2 细胞接毒和传代
            2.2.3 细胞收毒
            2.2.4 病毒的亚克隆
            2.2.5 分离株滴度测定
        2.3 Meq基因的序列测定分析
            2.3.1 PCR反应体系与条件
            2.3.2 DNA胶回收
            2.3.3 目的基因与pMD19-T载体连接
            2.3.4 重组质粒转化
            2.3.5 重组质粒的筛选和鉴定
        2.4 免疫保护实验
        2.5 指标测定
        2.6 数据统计
    3 结果和分析
        3.1 PCR检测结果
        3.2 NC株的分离培养和滴度测定
        3.3 致病基因Meq的扩增和序列分析
            3.3.1 Meq基因的PCR扩增
            3.3.2 Meq基因的序列分析
        3.4 MDV疫苗免疫保护实验结果
            3.4.1 发病率
            3.4.2 死亡率
            3.4.3 肿瘤发生率
            3.4.4 疫苗的保护指数
            3.4.5 体重变化
            3.4.6 外周淋巴细胞带毒检测结果
            3.4.7 羽毛囊带毒检测结果
    4. 讨论
        4.1 MDV NC株Meq基因
        4.2 MDV NC株毒力检测及CVI988/Rispens疫苗的保护力
        4.3 鸡外周血和羽毛囊中MDV的带毒规律
        4.4 肿瘤的体内分布
    5. 结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3660146