异源O-抗原重组鼠伤寒沙门菌疫苗候选株的构建及其免疫效果评价
发布时间：2022-08-01 16:01
沙门菌能够引起多种动物的胃肠道疾病,其包含多种流行性血清型。O-抗原是沙门菌的保护性抗原,其特异性抗体能够有效地清除细菌的感染。本研究通过异源表达O-抗原的策略,构建了三株表达纽波特沙门菌O-抗原的重组鼠伤寒沙门菌疫苗株,并在小鼠模型上评估了这些重组疫苗株的免疫原性和免疫保护效果。1鼠伤寒沙门菌重组株的构建利用Gibson组装法构建表达纽波特沙门菌O-抗原基因簇部分基因（wzx-wbaR-wbaL-wbaQ-wzy-wbaW-wbaZ）的表达质粒pCZ11,将其导入三株鼠伤寒沙门菌突变株SLT19（Δasd）、SLT20（ΔasdΔrfbN）、SLT22(ΔasdΔrfbN?pagL::TaraC PBAD rfbN)中,得到三株鼠伤寒沙门菌重组株SLT19（pCZ11）、SLT20（pCZ11）、SLT22（pCZ11）。银染和免疫印迹实验表明,SLT19（pCZ11）能够同时表达同源鼠伤寒沙门菌和异源纽坡特沙门菌O-抗原;SLT20（pCZ11）只表达异源O-抗原;阿拉伯糖存在时,SLT22（pCZ11）能够同时表达两种O-抗原,阿拉伯糖不存在时,只表达异源O...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1 沙门菌疫苗的研究进展
1.1 化学诱变减毒疫苗
1.2 抗生素诱导减毒疫苗
1.3 基因工程减毒疫苗
2 沙门菌O-抗原概述
2.1 O-抗原的合成
2.2 O-抗原的生物学功能
2.3 O-抗原的免疫原性及相关疫苗研究
3 研究目的和意义
第二章 鼠伤寒沙门菌重组株的构建
1 研究目的
2 材料
2.1 菌株和质粒
2.2 主要试剂
2.3 主要溶液的配制
2.3.1 培养基和抗生素
2.3.2 琼脂糖凝胶电泳相关试剂
2.3.3 SDS-PAGE相关试剂
2.3.4 Western-blot相关试剂
2.4 主要仪器
3 实验方法
3.1 引物设计
3.2 感受态细胞的制备和转化
3.2.1 感受态细胞的制备
3.2.2 转化
3.3 重组自杀性质粒pRE112-ΔrfbN、pRE112-Δasd、pRE112-Δcrp、pRE112-ΔpagL的构建
3.4 重组自杀性质粒pRE112-?pagL::TaraCPBADrfbN的构建
3.5 鼠伤寒沙门菌基因缺失株的构建
3.6 多糖表达质粒pCZ11的构建
3.7 重组株的LPS表型鉴定
3.7.1 样品处理
3.7.2 SDS-PAGE
3.7.3 银染
3.7.4 Western-blot
4 结果与分析
4.1 鼠伤寒沙门菌突变株的构建
4.2 多糖表达质粒的构建
4.3 重组株的LPS表型图谱
5 讨论
6 小结
第三章 鼠伤寒沙门菌重组株生物学特性及毒力研究
1 研究目的
2 材料
2.1 菌株
2.2 主要试剂
2.3 实验动物
2.4 主要试剂的配制
2.5 主要仪器
3 实验方法
3.1 重组株的运动性测定
3.2 重组株对多黏菌素B和胆盐的敏感性测定
3.3 定殖实验
3.4 毒力(LD50)测定
4 结果分析
4.1 鼠伤寒沙门菌重组株的运动性
4.2 多黏菌素B和胆盐的敏感性
4.3 鼠伤寒沙门菌重组株定殖和侵袭能力测定
4.4 毒力测定
5 讨论
6 小结
第四章 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的免疫原性及交叉保护力
1 研究目的
2 材料
2.1 菌株
2.2 主要试剂
2.3 实验动物
2.4 主要试剂的配制
2.5 主要仪器
3 实验方法
3.1 毒力(LD50)测定
3.2 疫苗株的免疫接种
3.3 样品采集
3.4 免疫检测
3.5 攻毒挑战
3.6 血清杀菌实验
3.7 组织病理检测HE染色
4 结果分析
4.1 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的毒力
4.2 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的免疫原性
4.3 血清杀菌效果测定
4.4 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的免疫保护效果
4.5 小鼠组织H&E染色结果
5 讨论
6 小结
结论
参考文献
致谢
附录
作者简历
本文编号：3667749
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1 沙门菌疫苗的研究进展
1.1 化学诱变减毒疫苗
1.2 抗生素诱导减毒疫苗
1.3 基因工程减毒疫苗
2 沙门菌O-抗原概述
2.1 O-抗原的合成
2.2 O-抗原的生物学功能
2.3 O-抗原的免疫原性及相关疫苗研究
3 研究目的和意义
第二章 鼠伤寒沙门菌重组株的构建
1 研究目的
2 材料
2.1 菌株和质粒
2.2 主要试剂
2.3 主要溶液的配制
2.3.1 培养基和抗生素
2.3.2 琼脂糖凝胶电泳相关试剂
2.3.3 SDS-PAGE相关试剂
2.3.4 Western-blot相关试剂
2.4 主要仪器
3 实验方法
3.1 引物设计
3.2 感受态细胞的制备和转化
3.2.1 感受态细胞的制备
3.2.2 转化
3.3 重组自杀性质粒pRE112-ΔrfbN、pRE112-Δasd、pRE112-Δcrp、pRE112-ΔpagL的构建
3.4 重组自杀性质粒pRE112-?pagL::TaraCPBADrfbN的构建
3.5 鼠伤寒沙门菌基因缺失株的构建
3.6 多糖表达质粒pCZ11的构建
3.7 重组株的LPS表型鉴定
3.7.1 样品处理
3.7.2 SDS-PAGE
3.7.3 银染
3.7.4 Western-blot
4 结果与分析
4.1 鼠伤寒沙门菌突变株的构建
4.2 多糖表达质粒的构建
4.3 重组株的LPS表型图谱
5 讨论
6 小结
第三章 鼠伤寒沙门菌重组株生物学特性及毒力研究
1 研究目的
2 材料
2.1 菌株
2.2 主要试剂
2.3 实验动物
2.4 主要试剂的配制
2.5 主要仪器
3 实验方法
3.1 重组株的运动性测定
3.2 重组株对多黏菌素B和胆盐的敏感性测定
3.3 定殖实验
3.4 毒力(LD50)测定
4 结果分析
4.1 鼠伤寒沙门菌重组株的运动性
4.2 多黏菌素B和胆盐的敏感性
4.3 鼠伤寒沙门菌重组株定殖和侵袭能力测定
4.4 毒力测定
5 讨论
6 小结
第四章 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的免疫原性及交叉保护力
1 研究目的
2 材料
2.1 菌株
2.2 主要试剂
2.3 实验动物
2.4 主要试剂的配制
2.5 主要仪器
3 实验方法
3.1 毒力(LD50)测定
3.2 疫苗株的免疫接种
3.3 样品采集
3.4 免疫检测
3.5 攻毒挑战
3.6 血清杀菌实验
3.7 组织病理检测HE染色
4 结果分析
4.1 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的毒力
4.2 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的免疫原性
4.3 血清杀菌效果测定
4.4 鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的免疫保护效果
4.5 小鼠组织H&E染色结果
5 讨论
6 小结
结论
参考文献
致谢
附录
作者简历
本文编号：3667749
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