牛IFN-α、IFN-β荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2022-08-01 18:52

　　建立一种检测牛IFN-α、IFN-β基因SYBY GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,旨在为抗病毒相关研究奠定基础。设计合成扩增牛IFN-α、IFN-β基因的特异性引物,采用RT-PCR从牛脾脏中扩增出目的DNA片段,将其克隆至pMD18-T载体获得牛IFN-α、IFN-β质粒标准品,以质粒标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立牛IFN-α、IFN-β基因SYBY GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,结果表明,牛IFN-α、IFN-β标准曲线的R2分别为0.958 8和0.996 52,线性良好;扩增效率为0.97和0.91,效率高;熔解曲线均为单峰,特异性较高,并具有良好的重复。结果证实,本研究所建立的方法敏感性高,特异性强,重复性好。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 引物设计与合成
    1.4 质粒标准品的构建
        1.4.1 牛脾脏组织总RNA的提取
        1.4.2 反转录
        1.4.3 PCR反应
        1.4.4 核酸凝胶电泳试验
        1.4.5 基因克隆与序列分析
    1.5 标准曲线的构建
        1.5.1 测定质粒标准品的浓度
        1.5.2 荧光定量PCR标准曲线的建立
    1.6 荧光定量PCR的重复性试验
    1.7 荧光定量PCR的特异性试验
    1.8 荧光定量PCR的敏感性试验
2 结果
    2.1 核酸琼脂糖凝胶电泳结果
    2.2 序列分析结果
    2.3 质粒标准品的制备
    2.4 荧光定量PCR标准曲线的建立结果
    2.5 荧光定量PCR的重复性试验结果
    2.6 荧光定量PCR的特异性试验结果
    2.7 荧光定量PCR的敏感性试验结果
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]牛Ⅰ型干扰素家族新成员（IFN-ε、IFN-κ、IFN-χ）抗病毒信号转导与表达调控研究[D]. 郭永丽.东北农业大学 2017

硕士论文
[1]绵羊白介素1β及其受体拮抗因子荧光定量PCR检测方法的建立与应用[D]. 迟丹.吉林大学 2016



本文编号：3667989