水牛囊胚发育阶段对原始态/始发态胚胎干细胞分离培养的影响

发布时间：2022-08-04 10:07

　　胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESCs）的建系受其细胞来源以及培养环境等多种因素的影响,其中来自囊胚的ESCs受囊胚所处发育阶段的影响最大。囊胚形成到囊胚植入子宫壁期间,其多能性细胞处于一种不断自我更新和分化的过程,可能同时存在不同状态的多能性细胞并最终决定其衍生的ESCs的多能性状态。因此,本研究拟探讨不同发育阶段胚胎的多能性基因表达模式及其对分离培养水牛类ESCs效果的影响,并分析其所处的多能性状态,以期确定适合水牛类ESCs分离培养的囊胚发育阶段。首先,对水牛不同发育阶段早期胚胎（桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚）的多能性相关基因的表达模式进行了分析,发现多能性基因主要在桑椹胚和早期囊胚表达,原始态相关基因KLF4、TBX3和REX-1在这两个阶段高水平表达；囊胚是一个相对沉默的基因表达时期,大部分多能性基因表达下调；扩张囊胚中KLF4、TBX3和REX-1表达量较低且高表达始发态相关基因FGF5。对培养至第5天的水牛胚胎进行2i （1 μmol/mL PD0325901,3 μmol/mL CHIR99021）培养处理,发现2i培养处理对水牛... 

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略词
综述部分
    第一章 原始态(Naive state)和始发态(Primed state)胚胎干细胞的研究进展
        1 胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)研究简史
        2 原始态(Naive State)和始发态(Primed State)胚胎干细胞
            2.1 小鼠胚胎干细胞(mouse ESCs,mESCs)和人胚胎干细胞(human ESCs,hESCs)的异同
                2.1.1 mESCs和hESCs的共同特点
                2.1.2 mESCs和hESCs的差异
            2.2 多能性干细胞的不同状态：原始态(Naive State)和始发态(Primed State)
                2.2.1 原始态多能性干细胞
                2.2.2 始发态多能性干细胞
                2.2.3 原始态和始发态多能性干细胞之间的转换
                2.2.4 影响原始态和始发态多能性干细胞衍生的重要因素
        3 2i抑制剂对原始态ESCs的维持
        4 牛和水牛ESCs研究进展
        5 研究目的与意义
试验部分
    第二章 水牛不同发育阶段胚胎的多能性基因表达模式研究
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 试验样品及来源
                1.1.2 主要试验试剂及药品
                1.1.3 主要仪器和耗材
                1.1.4 主要溶液配制
                1.1.5 生物软件
            1.2 试验方法
                1.2.1 水牛卵母细胞的体外受精与胚胎培养
                1.2.2 水牛囊胚的收集与微量反转录为cDNA
                1.2.3 qRT-PCR检测基因在mRNA水平的表达情况
                1.2.4 胚胎的免疫组织化学
            1.3 试验设计
            1.4 统计分析
        2 结果
            2.1 水牛不同发育阶段胚胎相关多能性基因表达模式分析
            2.2 2i对水牛胚胎发育的影响
            2.3 2i对水牛不同发育阶段囊胚多能性的影响
        3 讨论
        4 结论
    第三章 水牛囊胚发育阶段对水牛类ESCs分离培养效果的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 试验样品与来源
                1.1.2 主要试验试剂及药品
                1.1.3 主要溶液配制
            1.2 试验方法
                1.2.1 饲养层的制备
                1.2.2 水牛类ESCs的分离培养
                1.2.3 水牛类ESCs鉴定
                1.2.4 试验设计
                1.2.5 统计分析
        2 结果分析
            2.1 不同发育阶段囊胚及2i对水牛类ESCs初步衍生的影响
            2.2 不同发育阶段囊胚源的类ESCs的多能性基因表达模式
            2.3 水牛类ESCs的生物特性分析
        3 讨论
        4 结论
    第四章 水牛类ESCs多能性状态的研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 实验样品及来源
                1.1.2 主要试验试剂及药品
                1.1.3 主要试剂配制
            1.2 试验方法
                1.2.1 H3K27me3检测雌性水牛类ESCs XaXa染色体活性
                1.2.2 检测原始态基因(REX-1、KLF4、TBX3)和始发态基因(FGF5、ACTA2)的表达
                1.2.3 检测水牛类ESCs对不同多能性信号因子的反应
        2 结果
            2.1 雌性水牛类ESCs性染色体活性状态分析
            2.2 检测原始态多能性基因REX-1、KLF4、TBX3和始发态多能性基因FGF5的表达
            2.3 检测水牛类ESCs对不同多能性信号的反应
        3 讨论
        4 结论
全文结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表学术论文



本文编号：3669341