猪肠外致病性大肠杆菌ompX基因缺失株构建及生物学特性研究

发布时间：2022-08-08 14:28

　　肠外致病性大肠杆菌（Extraintestinal Pathogenic E.coli,ExPEC）,是一种重要的人畜共患病病原菌,主要通过其特有的毒力因子侵袭定植到人和动物肠道外组织引起疾病。近年来,本实验室从临床中分离到大量猪源性ExPEC,多表现为多重耐药的特性,使得抗生素的治疗效果大大降低,而且由于ExPEC的致病机制尚未阐明,也缺乏有效的疫苗加以控制,给养殖业造成严重的威胁。另外,猪源ExPEC特定的毒力因子、种群、血清型与人ExPEC相似,具有潜在的人类感染风险。为有效控制猪源ExPEC的感染,筛选有效的免疫保护性抗原,研发有效的疫苗,具有重要的意义。OmpX是一种重要的细菌外膜蛋白,属于Ail蛋白家族。该蛋白在其他细菌中参与细菌对细胞的黏附和侵袭,对抗宿主的免疫防御等,且与细菌的毒力有密切关系。因此,被认为有可能作为疫苗开发的候选靶标。本试验以猪源ExPEC PCN042为野生株,通过同源重组构建ompX基因缺失株及其回复补偿株,研究其生物学特性,探讨ompX在ExPEC多重耐药性、生物被膜和致病性中的作用。主要研究结果如下：1.ompX基因缺失株及回补株的构建从野生株P... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词
1 文章综述
    1.1 肠外致病性大肠杆菌概述
        1.1.1 大肠杆菌简介
        1.1.2 大肠杆菌分类
        1.1.3 大肠杆菌分群
        1.1.4 肠外致病性大肠杆菌及其危害
    1.2 ExPEC毒力因子及致病机制
    1.3 细菌外膜蛋白OmpX及其功能研究
        1.3.1 外膜蛋白及其功能
        1.3.2 外膜蛋白OmpX及其功能研究
2 研究目的和意义
3 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 质粒
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 培养基与抗生素及其配制
        3.1.5 电泳相关溶液配制
        3.1.6 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 外膜蛋白基因ompX缺失株的构建
        3.2.2 ompX基因缺失回补株的构建
        3.2.3 ompX基因缺失株和回补株Cm△ompX SDS-PAGE验证
        3.2.4 ompX基因缺失株遗传稳定性测定
        3.2.5 缺失株生长特性测定
        3.2.6 运动性检测
        3.2.7 耐药性评价
        3.2.8 生物被膜形成能力的评价
        3.2.9 细胞致病性试验
        3.2.10 小鼠毒力试验LD_(50)的测定
        3.2.11 组织器官载菌量的测定
4 结果与分析
    4.1 ompX上下同源臂的扩增
    4.2 ompX上下游同源臂的重叠
    4.3 pRE112-△ompX重组质粒双酶切鉴定
    4.4 双亲本结合转移筛选ompX缺失株的PCR鉴定
    4.5 △ompX互补菌株Cm△ompX的构建
    4.6 SDS-PAGE对ompX缺失株和回补株进行验证
    4.7
        4.7.1 遗传稳定性分析
        4.7.2 生长特性分析
    4.8 运动性测定
    4.9 生物被膜形成能力测定
    4.10 耐药性研究
    4.11 细胞黏附侵袭能力分析
    4.12 胞内存活试验
    4.13 小鼠感染试验
        4.13.1 小鼠感染试验及LD_(50)测定
        4.13.2 组织器官载菌量测定
5 讨论
    5.1 基因缺失突变株的构建
    5.2 ompX基因在ExPEC群体行为中的作用分析
    5.3 ompX基因缺失可影响ExPEC对四环素和头孢噻肟敏感性
    5.4 ompX基因在ExPEC致病性中发挥重要作用
6 结论
参考文献
致谢



本文编号：3671681