利用体细胞核移植技术生产转基因绒山羊的研究

发布时间：2022-08-12 09:27

　　绒山羊体细胞核移植技术的研究目前处于刚刚起步阶段。本实验初步建立了转基因绒山羊克隆技术体系,并探讨了不同类型细胞对绒山羊克隆效率的影响,同时对转基因绒山羊进行了初步的鉴定以及生产性能检测。1.绒山羊体细胞核移植技术的建立：成功体外培养并且保存了四个胎儿来源的绒山羊胎儿成纤维细胞（caprine fetal fibroblast cells,CFC）以及两个成体耳尖成纤维细胞（caprine ear fibroblast cells, CEFC）,并通过SRY-PCR方法鉴定了CFCs的性别。使用本实验室构建成功的真核表达载体通过脂质体转染CFC,经G418筛选获得了多个CFCs转基因细胞系（transgenic caprine fetal fibroblast cells, TCFC）。 TCFC高效表达外源标记基因红色荧光蛋白,且生长里旺盛,经PCR鉴定外源目的基因已经稳定整合入TCFC基因组中。在检测转基因克隆胚胎发育能力时,绒山羊卵母细胞成熟率为72.6%（420/578）,通过体细胞核移植获得重构胚胎419枚,卵裂率为86.1%（361/419）,囊胚率为14.8%（62/41... 

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【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
目录
縮略词表
引言
    参考文献
第一章 转基因体细胞核移植绒山羊体系的初步建立
    前言
    1 材料
        1.1 主要仪器设备和试剂
        1.2 实验材料
        1.3 试剂及耗材
        1.4 实验所需溶液的配制
    2 方法
        2.1 阿尔巴斯绒山羊胎儿成纤维细胞(caprine fetal fibroblast cells,CFCs)以及耳尖成纤维细胞(caprine ear fibroblast cells,CEFCs)的分离培养
        2.2 阿尔巴斯绒山羊胎儿成纤维细胞的性别鉴定
        2.3 转基因阿尔巴斯绒山羊细胞的获得及鉴定
        2.4 绒山羊体细胞核移植体系的构建
        2.5 胚胎移植与产羔
    3 结果
        3.1 阿尔巴斯绒山羊胎儿成纤维细胞以及耳尖成纤维细胞的分离培养
        3.2 阿尔巴斯绒山羊胎儿成纤维细胞的性别鉴定
        3.3 转基因阿尔巴斯绒山羊细胞的获得及鉴定
        3.4 绒山羊体细胞核移植技术体系的建立
        3.5 转基因克隆黑羊的产黑与管理
    4 讨论
    参考文献
第二章 供体细胞类型和受体羊条件对绒山羊体细胞核移植效率的影响
    引言
    1 材料与方法
        1.1 试剂及耗材
        1.2 绒山羊胎儿成纤维细胞(Caprine Fetal Fibroblast Cells,CFCs)与成体耳尖成纤维细胞(Caprine Ear Fibroblast Cells,CEFCs)的分离及性别鉴定
        1.3 绒山羊成纤维细胞的转染和筛选以及鉴定及供体细胞的准备
        1.4 绒山羊卵母细胞的采集,体外成熟与核移植操作
        1.5 胚胎移植与克隆羊的生产
        1.6 克隆效率计算
        1.7 数据分析
    2 结果
        2.1 不同细胞来源对克隆效率的影响
        2.2 不同种类成纤维细胞对克隆效率的影响
        2.3 非转基因供体细胞与转基因供体细胞对克隆效率的影响
        2.4 性别对克隆效率的影响
        2.5 不同年份受体羊排卵点数对克隆效率的影响
    3 讨论
    参考文献
第三章 转基因克隆绒山羊的鉴定与生产性能检测
    前言
    1 仪器设备与试剂材料
    2 方法
        2.1 克隆羔羊基本数据的采集
        2.2 克隆羔羊耳尖成纤维细胞的采集
        2.3 转基因羔羊初步鉴定
        2.4 转基因羊生产性能检测与筛选
    3 结果
        3.1 转基因克隆羔羊与体细胞克隆羔羊妊娠天数如初生重的对比
        3.2 克隆羔羊耳尖成纤维细胞的培养
        3.3 转基因羔羊初步鉴定
        3.4 转基因羊生产性能检测
    4 讨论
    参考文献
结论
综述部分
    第一章 转基因动物研究方法
        1 显微注射核酸法获得转基因动物
        2. 干细胞介导获得转基因动物
        3 体细胞核移植法
    第二章 影响体细胞核移植的因素
        1 供体细胞对体细胞核移植效率的影响
        2 卵母细胞质量与克隆胚胎对克隆效率的影响
        3 胚胎移植方法与动物后期管理对克隆效率的影响
    参考文献
致谢
博士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]精子载体法制备转基因动物的研究进展[J]. 杜伟,崔海信,王琰,孙长娇,赵翔.  生物技术通报. 2012(12)
[2]胚胎移植方法和受体母猪因素对克隆猪生产效率的影响[J]. 卫恒习,李秋艳,高凤磊,李燕,张守全,李宁.  中国农业科学. 2012(15)
[3]转基因家蚕生产含蜘蛛丝蛋白的新型复合茧丝纤维[J]. 张袁松,赵天福,赵爱春,文红秀,中垣雅雄.  纺织学报. 2012(05)
[4]不同转染方法转染牛体细胞效率的比较[J]. 李松,丁方荣,戴蕴平,朱士恩.  农业生物技术学报. 2011(06)
[5]不同激活方法对绒山羊卵母细胞孤雌发育的影响[J]. 金永,袁建龙,朱兵,郭旭东,刘东军.  农业生物技术学报. 2011(03)
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[7]蛛丝蛋白基因在大肠杆菌中表达研究[J]. 施长华,孟清.  生物学杂志. 2011(01)
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[9]精子载体法转基因技术研究进展[J]. 路立里,郝耿,於建国,马帧,杨会国.  中国畜牧兽医. 2010(09)
[10]慢病毒载体的构建及其应用于转基因动物的研究进展[J]. 孙克宁,朱化彬,林峰,王栋,郝海生,杜卫华,赵学明.  中国畜牧兽医. 2010(08)

硕士论文
[1]毛囊细胞特异表达胸腺素β4基因转基因绒山羊研究[D]. 金永.内蒙古大学 2011
[2]体细胞克隆牛生产及新生犊牛护理[D]. 董树华.内蒙古农业大学 2010



本文编号：3675629