犬松弛素原基因原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2022-10-04 11:53

　　松弛素作为胰岛素超家族中的一种多肽激素,在生殖机能和很多非生殖生理过程中发挥重要的调控作用,而血中松弛素被看成是犬（Canis lupus）和部分其他动物妊娠的标志。为了简便高效获取犬松弛素,以及开发具有临床应用价值的犬松弛素生物制剂,本研究进行犬松弛素原基因的原核表达及制备其多克隆抗体的研究,即以包含犬前松弛素原基因cDNA的质粒pMD19-T-Cpreprorelaxin1为材料,PCR扩增犬松弛素原基因cDNA,与表达载体pET28a连接,转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）,异丙基-β-d-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG）诱导重组蛋白表达,对表达产物以及纯化后重组蛋白用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和Western blot实验进行鉴定;以纯化犬松弛素原重组蛋白为免疫原,免疫家兔（Oryctolagus cuniculus）制备多克隆抗体,酶联免疫吸附实验（en... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 质粒、菌株和实验动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 引物设计与引物合成
    1.2 实验方法
        1.2.1 犬pro RLX原核表达载体的构建与鉴定
        1.2.2 犬松弛素原重组蛋白的诱导、纯化与鉴定
        1.2.3 家兔免疫接种抗体分析
2 结果与分析
    2.1 犬松弛素原原核表达载体的构建
    2.2 犬松弛素原重组蛋白的表达与纯化
    2.3 犬松弛素原多克隆抗体制备与分析
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]犬前松弛素原基因的克隆与生物信息学分析[J]. 任志华,夏娟,刘欢欢,余树民,沈留红,曹随忠,左之才,邓俊良,马晓平.  南京农业大学学报. 2016(06)
[2]人黄体松弛素原基因的克隆及在大肠杆菌中的初步表达[J]. 丁传天,杨新科,毕胜利,范灵芝,闻良珍,侯云德.  中华实验和临床病毒学杂志. 1997(04)



本文编号：3684979