伪狂犬病病毒潜伏感染相关转录物LLT表达特征的研究

发布时间：2022-10-08 22:13

　　伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是一种由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起多种家畜和野生动物的急性、热性传染病,但只有猪是PRV的唯一贮存宿主。伪狂犬病能给养猪业造成极大的经济损失,特别是2011年末以来PRV变异株在我国的爆发流行,严重影响了养猪业的健康发展。与其他疱疹病毒类似,PRV急性感染后能够在宿主体内形成潜伏感染,潜伏感染时期,病毒基因组不复制,也不表达病毒蛋白,仅大量转录病毒潜伏相关转录物（Latency Associated Transcripts,LATs）。然而,长期以来,关于LAT转录特征及调控机制的研究较为缺乏,其转录与调控机制及对病毒感染复制的影响也不清楚。LATs是由大的潜伏相关转录本（Large Latency Transcripts,LLT）分子剪接加工形成的,为了研究PRV LLT两个启动子LAP1和LAP2在其转录调控方面的作用机制,本研究首先构建一系列供体质粒,包括缺失LAP1、缺失LAP1并添加绝缘子cHS4或添加强启动子CMV、同时缺失LAP1/P2等。然后,利用BAC/galK系统将galK基因替换LLT... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 伪狂犬病概述
        1.1.1 伪狂犬病
        1.1.2 伪狂犬病病毒的历史
    1.2 伪狂犬病病毒的分子生物学
        1.2.1 伪狂犬病病毒结构特征
        1.2.2 疱疹病毒的复制
        1.2.3 伪狂犬病病毒感染机制
    1.3 伪狂犬病病毒潜伏感染研究进展
    1.4 疱疹病毒miRNA研究进展
    1.5 BAC/galK重组系统原理与应用
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 LLT启动子缺失突变病毒的构建拯救及其体外生物学特性分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 病毒、细胞、质粒和菌株
        2.1.2 主要工具酶和试剂
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 常用试剂的配制
        2.1.5 常用培养基的配制
        2.1.6 本章节引物设计
        2.1.7 缺失LLT启动子突变病毒相关供体质粒的构建
        2.1.8 正筛选SW102-BAC-galk的构建
        2.1.9 负筛选系统
        2.1.10 突变病毒拯救
        2.1.11 突变病毒体外生物学特性分析
    2.2 结果
        2.2.1 pB-L1-R1质粒的构建及鉴定
        2.2.2 pB-L1-cHS4-R1质粒的构建及鉴定
        2.2.3 pB-L1-cHS4-R2质粒的构建与鉴定
        2.2.4 pB-L1-CMVp-R1质粒的构建及鉴定
        2.2.5 pB-L1-BGH-R3 质粒的构建及鉴定
        2.2.6 pB-L1-cHS4-BGH-R3质粒的构建及鉴定
        2.2.7 GalK基因的获得
        2.2.8 正筛选SW102-BAC-galk鉴定结果
        2.2.9 负筛选SW102-BAC-△LAP1鉴定结果
        2.2.10 负筛选SW102-BAC-cHS4-△LAP1a鉴定结果
        2.2.11 负筛选SW102-BAC-cHS4-△LAP1b鉴定结果
        2.2.12 负筛选SW102-BAC-CMVp-△LAP1鉴定结果
        2.2.13 负筛选SW102-BAC-△LAP1/P2 鉴定结果
        2.2.14 负筛选SW102-BAC-cHS4-△LAP1/P2鉴定结果
        2.2.15 拯救突变病毒
        2.2.16 突变病毒体外生物学特性分析结果
    2.3 讨论
第三章 启动子缺失突变病毒体内外转录 LLT相关分子的特征分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 病毒与细胞
        3.1.2 工具酶、试剂、仪器设备以及培养基
        3.1.3 实验动物
        3.1.4 本章节引物设计
        3.1.5 突变病毒感染Vero细胞LLT表达特征的研究
        3.1.6 双缺失启动子突变病毒感染小鼠致病性及其组织中LLT表达特征研究
        3.1.7 突变病毒感染Vero细胞miRNA表达特征的研究
    3.2 结果
        3.2.1 突变病毒感染Vero细胞LLT表达特征
        3.2.2 双缺失启动子突变病毒感染小鼠致病性实验
        3.2.3 双缺失启动子突变病毒感染小鼠组织的LLT表达特征
        3.2.4 JS-2012感染Vero细胞miRNA表达特征
        3.2.5 突变病毒感染Vero细胞miRNA表达特征
    3.3 讨论
第四章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]应用Cre/loxp系统构建含有BAC序列的重组伪狂犬病毒[J]. 王涛,童武,叶超,于之清,梁超,李国新,高飞,单同领,于海,郑浩,童光志.  中国动物传染病学报. 2017(02)
[2]免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J]. 童武,张青占,郑浩,刘飞,姜一峰,单同领,周艳君,童光志.  中国动物传染病学报. 2013(03)
[3]用基于galK的同源重组的方法构建arc基因表达增强的载体[J]. 邓蓉康,杜晓霞,陈米娜,季一飞,崔义元.  华西医学. 2008(03)



本文编号：3688524