绒山羊CRISP2和PDIA3相互结合的研究

发布时间：2022-10-10 20:22

　　哺乳动物的精卵融合过程是个复杂而精巧的事件,需要一些特异性蛋白相互作用来介导。其中精子上的PDIA3（ERp57）是蛋白二硫键异构酶（protein disulfide isomerase, PDI）家族的成员,具有催化二硫键的功能,CRISP2是富含半胱氨酸的分泌蛋白（cysteine secretory proteins, CRISPs）家族的成员,具有16个保守的半胱氨酸和它们所形成的复杂的二硫键,这两种蛋白质都参与了精卵的融合过程,但是到目前为止这两种蛋白质在精卵结合与融合过程中的作用机制尚不清楚。我们猜测PDIA3可能会催化CRISP2分子中的二硫键从而引起其构象发生改变而介导精卵融合。为了验证这一想法,本实验构建了绒山羊PDIA3和CRISP2成熟肽和分段真核表达载体,用免疫共沉淀和酵母双杂交技术检测了PDIA3与CRISP2能否互相结合。 首先根据本实验室克隆的绒山羊CRISP2（GU362703.1）和PDIA3的cDNA序列（GU985268.1）,分析了它们的结构特点及其功能域后,将其各分为两段,即CRISP2A （24～176aa,去掉信号肽后）、CRISP... 

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 研究论文
    第一章 绒山羊CRISP2和PDIA3分段后真核表达载体和酵母双杂交载体的构建
        前言
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 真核表达载体pcDNA-CRISP2、pcDNA-CRISP2A、pcDNA-CRISP2B、pcDNA-Pdia3、pcDNA-Pdia3A、pcDNA-Pdia3B的构建
            2.2 酵母载体pGADT7-CRISP2A、pGADT7-CRISP2B、pGBKT7-PDIA3A和pGBKT7-PDIA3B的构建
        3 讨论
    第二章 CRISP2与PDIA3的相互结合的鉴定
        前言
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 实验步骤
        2 结果
            2.1 免疫共沉淀及Western blot结果
            2.2 CRISP2与PDIA3的酵母双杂交鉴定结果
        3 讨论
第二部分 文献综述 绒山羊CRISP2和PDIA3的结构及其功能
    1. CRISP2蛋白的结构特点和功能特点
    2. PDIA3蛋白的结构特点和功能特点
        2.1 PDIA3在内质网上的作用
        2.2 细胞表面的PDIA3
        2.3 细胞液中的PDIA3
        2.4 细胞核中的PDIA3
        2.5 线粒体中的PDIA3
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文和参加的项目



本文编号：3690293