马麝出血症病毒VP60主要抗原表位区的串联表达及对家兔的免疫保护效力分析

发布时间：2022-10-11 11:14

　　马麝病毒性出血症（Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease,McVHD）为马麝的一种急性、高度致死性传染病,其病原马麝出血症病毒（Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus,McHDV）与兔出血症病毒高度同源。为了筛选McHDV保护性抗原,为McVHD疫苗研究奠定基础,文中通过对McHDV主要结构蛋白VP60抗原表位的分析,设计引物,应用RT-PCR技术扩增获得三段VP60主要抗原表位区核酸序列,并采用重叠延伸PCR将3段产物连接后克隆至原核表达载体pET-28a（+）,成功构建原核表达质粒pET-truncated-VP60后转化大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）,并经IPTG诱导表达。纯化表达产物免疫3–4月龄非RHD免疫兔,血凝抑制试验测定抗血清效价。首次免疫后21 d,通过攻毒保护试验分析重组蛋白的免疫保护效力。结果表明,McHDV VP60主要抗原表位蛋白在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子质量约为45 kDa,且以包涵体形式存在;重组蛋白纯化后配制疫... 

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 毒株、菌种及实验动物
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计
    1.4 McHDV VP60主要抗原表位序列的扩增
    1.5 McHDV VP60主要抗原表位的原核表达
        1.5.1 原核表达载体的构建
        1.5.2 McHDV VP60主要抗原表位重组蛋白的表达
    1.6 重组蛋白的纯化及抗血清制备
    1.7 多克隆抗体的Western blotting检测
    1.8 免疫保护试验
        1.8.1 免疫原的制备
        1.8.2 动物免疫
        1.8.3 攻毒试验
    1.9 病毒检测
    1.1 0 细菌检查
2 结果与分析
    2.1 McHDV VP60主要抗原表位的扩增与重组
    2.2 原核表达质粒pET-truncated-VP60鉴定
    2.3 McHDV VP60主要抗原表位串联序列的原核表达
    2.4 多克隆抗体的制备及效价测定
    2.5 免疫保护效力
        2.5.1 抗体检测
        2.5.2 攻毒实验
    2.6 病毒检测
    2.7 细菌检查
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种新的动物传染病——马麝病毒性出血症[J]. 包世俊,邢小勇,丁小琴,高翔,安凯,伏小平,薛慧文.  中国农业科学. 2018(05)
[2]小反刍兽疫病毒甘肃株F基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 肖敏,包世俊,邢小勇,常惠芸,薛慧文.  农业生物技术学报. 2017(03)
[3]兔出血症病毒ZB分离株VP60基因克隆、截短表达与活性鉴定[J]. 杨丽梅,马力,张志美,徐倩倩,郭时金,沈志强,李峰,张颖,王艳萍.  动物医学进展. 2013(09)
[4]兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价[J]. 原冬伟,刘家森,郭东春,司昌德,姜骞,林欢,穆亚芳,刘行波,曲连东.  中国兽医学报. 2011(11)
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[6]青海马麝肠道寄生虫感染情况调查[J]. 吕向辉,乔继英,吴晓民,王静,胡罕,裴俊峰,张洪峰,封托,王启军,孔飞,李涤非.  中国兽医杂志. 2010(12)
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[8]马麝出血性肺炎的病理学观察[J]. 路浩,胡俊杰,黄有德,刘宗平,赵宝玉.  中国兽医杂志. 2010(06)
[9]马麝呼吸系统疾病病原学研究[J]. 路浩,黄有德,刘宗平.  中国兽医学报. 2008(01)
[10]不同来源雌性圈养马麝行为格局的比较研究[J]. 孟秀祥,杨奇森,冯祚建,赵昌杰,惠岑怿,徐宏发.  吉林农业大学学报. 2007(06)

硕士论文
[1]兔瘟病毒VP60基因重组真核质粒的构建及其免疫原性[D]. 鲁忠祥.四川农业大学 2015



本文编号：3690473