SCD1在鹅肝细胞对棕榈酸耐受中的作用研究

发布时间：2022-10-19 15:19

　　饱和脂肪酸含量的增加能引起哺乳动物肝细胞发生内质网应激、炎症、凋亡等反应,是导致脂肪肝病变的原因之一。硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1）作为饱和脂肪酸去饱和的关键酶,在缓解脂肪肝病变中具有关键作用。SCD1在鹅中的表达丰度和基因组拷贝数显著高于哺乳动物,推测SCD1在保护鹅肥肝脂肪代谢过程中发挥重要作用,然而,目前对SCD1在鹅肝饱和脂肪酸耐受性中的作用研究还未见报道。本研究利用不同浓度的棕榈酸处理鹅肝细胞,并以人正常肝细胞系LO2细胞作为参照,通过MTT检测鹅肝细胞对棕榈酸的最大耐受浓度,利用荧光定量PCR（qPCR）对内质网应激、炎症、细胞凋亡相关基因表达量变化情况进行检测,对鹅肝细胞的棕榈酸耐受能力进行评价;同时干扰SCD1探究其在鹅肝细胞对棕榈酸耐受中的作用及其作用途径。主要研究结果如下:（1）鹅肝细胞对棕榈酸的最大耐受浓度为0.6mM,而人肝细胞对棕榈酸的最大耐受浓度低于0.2mM。（2）在0.6mM棕榈酸处理下,鹅肝细胞内质网应激相关基因（XBP、BIP、ATF6）、炎症反应相关基因（IL-6、IL-1β、IFN-γ）、细胞凋亡相关基因（Bax、Bcl-2、Caspase-3... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
常用英文缩写词汇
前言
1 文献综述
    1.1 鹅肝脏脂肪变性特点
    1.2 肝脏脂肪代谢过程及其调控机制
        1.2.1 脂肪合成
        1.2.3 脂肪转运
        1.2.4 脂肪酸氧化
        1.2.5 鹅肝脏脂肪代谢调控机制
    1.3 棕榈酸与细胞脂毒性相关反应
        1.3.1 棕榈酸与细胞内质网应激
        1.3.2 棕榈酸与细胞炎症反应
        1.3.3 棕榈酸与细胞凋亡
    1.4 SCD1在脂质代谢及脂毒性相关反应中的作用
        1.4.1 SCD1概述
        1.4.2 SCD1在调控脂肪代谢中的作用
        1.4.3 SCD1在调控内质网应激中的作用
        1.4.4 SCD1在调控炎症反应中的作用
        1.4.5 SCD1在调控细胞凋亡中的作用
    1.5 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验样品
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要药品和试剂
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 引物设计及合成
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 棕榈酸处理细胞
        2.2.4 细胞转染siRNA
        2.2.5 MTT检测细胞活性
        2.2.6 油红O染色
        2.2.7 总RNA提取及质量检测
        2.2.8 反转录反应
        2.2.9 荧光定量PCR
        2.2.10 TUNEL检测细胞凋亡
        2.2.11 细胞色素c免疫荧光
        2.2.12 DAPI染色
    2.3 实验数据分析
3 结果与分析
    3.1 鹅肝细胞对棕榈酸的耐受性评价
        3.1.1 棕榈酸对细胞活性的影响
        3.1.2 棕榈酸对内质网应激基因表达的影响
        3.1.3 棕榈酸对炎症因子表达的影响
        3.1.4 棕榈酸对细胞凋亡基因表达的影响
        3.1.5 棕榈酸对脂肪酸去饱和过程中相关因子的影响
    3.2 鹅SCD1基因siRNA载体的筛选
        3.2.1 siRNA的设计与合成
        3.2.2 最佳siRNA序列筛选
    3.3 干扰SCD1对鹅肝细胞棕榈酸耐受性的影响
        3.3.1 细胞活性指标
        3.3.2 内质网应激基因表达量
        3.3.3 炎症因子基因表达量
        3.3.4 细胞凋亡基因表达量
    3.4 SCD1在鹅肝细胞棕榈酸耐受性中的作用途径
        3.4.1 干扰SCD1对TG合成相关基因的影响
        3.4.2 鹅肝细胞耐受途径筛选
4 讨论
    4.1 鹅肝细胞的棕榈酸耐受能力评价
    4.2 棕榈酸对鹅和人肝细胞脂肪酸去饱和的作用
    4.3 SCD1对鹅肝细胞棕榈酸耐受性的影响
    4.4 SCD1调控鹅肝细胞棕榈酸耐受性的机制
5 结论
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]填饲对朗德鹅SCD5、SREBP2和ELOVL6甲基化和mRNA表达的影响[J]. 方倩倩,李祥龙,唐军旺,田勇,沈建良,任晋东,邵荣益,卢立志.  农业生物技术学报. 2016(10)
[2]鹅SCD1基因真核表达载体构建及在肝细胞中的表达[J]. 张宜辉,张蕊,张军,王洪荣,龚道清.  上海交通大学学报(农业科学版). 2014(02)
[3]鹅肥肝形成相关基因的研究进展[J]. 邵丹,王来娣,张蕊,龚道清.  中国畜牧兽医. 2012(09)
[4]鹅LXRα基因的克隆及填饲对其mRNA水平的影响[J]. 韩春春,黄晓宇,王继文.  畜牧兽医学报. 2009(09)
[5]填饲对朗德鹅产肝性能、肝脏组织学和脂生成基因表达水平的影响[J]. 苏胜彦,李齐发,陈睿,曾怡,祝红生,张翔,王艳平,谢庄,吴松青,刘玉弟.  中国农业科学. 2009(07)
[6]朗德鹅肝脏和脂肪组织LXRα基因表达水平的比较[J]. 苏胜彦,李齐发,刘振山,王艳平,祝洪生,罗红荣,吴松青,谢庄.  农业生物技术学报. 2008(03)
[7]鹅肥肝形成的分子机理研究进展[J]. 瞿浩,王继文.  四川畜牧兽医. 2003(05)

博士论文
[1]Cideb和ADRP调控肝脏VLDL脂化成熟及脂稳态的作用研究[D]. 李烜赫.清华大学 2012

硕士论文
[1]鹅CYP7A1基因克隆、表达调节及表达规律的研究[D]. 杨堃.华中农业大学 2010
[2]鹅ChREBP基因克隆及其在肝脂肪变性中的作用初步研究[D]. 唐慧.四川农业大学 2010



本文编号：3693610