新城疫病毒诱导线粒体选择性自噬的研究
发布时间：2022-10-19 21:08
新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是严重危害家禽业的重要传染病病原,以高感染率和死亡率著称,在世界范围内广为流行。NDV能够通过内源性和外源性凋亡途径诱导细胞死亡,具有溶瘤特性。线粒体是存在于真核生物中的一个双层膜结构包裹的细胞器,在维持细胞稳态过程中扮演着多种重要的角色。越来越多证据表明:线粒体在抗病毒免疫、细胞凋亡和炎症等过程中发挥关键作用。NDV能够通过各种手段逃逸宿主抗病毒免疫,在禽源细胞系和肿瘤细胞系中高效复制,诱导宿主细胞死亡。但线粒体作为维持细胞稳态最重要的细胞器之一,在NDV感染细胞过程中发挥何种作用的研究较少。本研究通过透射电镜（EM）、免疫荧光（IFA）、Western blotting（WB）和免疫共沉淀（Co-IP）等手段证实NDV扰乱线粒体的融合-分裂稳态,通过ParkinPINK1通路调控线粒体自噬过程降解损伤的片段化线粒体,最后阐明片段化线粒体的降解对抑制宿主抗病毒免疫具有重要的生物学意义。本研究中,主要研究内容如下:1.观察了NDV感染细胞扰乱线粒体融合-分裂稳态。通过透射电镜和免疫荧光等方法,证实NDV感染诱导明显的线...
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 细胞自噬简述
1.1.1 细胞自噬分类
1.1.2 细胞自噬信号调控简述
1.1.3 选择性自噬简述
1.2 病毒感染劫持细胞自噬简述
1.2.1 细胞自噬正向调控病毒感染
1.2.2 细胞自噬负向调控病毒感染
1.3 线粒体简述
1.3.1 线粒体结构和功能
1.3.2 线粒体稳态调控的分子动力学
1.3.3 经典线粒体自噬信号的调控简述
1.4 病毒感染劫持线粒体促进病毒复制机制
1.4.1 病毒感染改变线粒体的空间分布,增强了线粒体的生物学功能
1.4.2 病毒通过扰乱线粒体融合-分裂稳态调控先天性免疫,促进病毒复制
1.4.3 抑制了MAVS依赖的先天性免疫反应
1.4.4 线粒体在病毒感染过程中的间接性作用
1.5 溶瘤性病毒简述
1.6 本研究目的意义
第二章 新城疫病毒感染扰乱线粒体融合-分裂稳态
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 细胞系、病毒和质粒
2.2.2 实验试剂
2.3 实验方法
2.3.1 转染
2.3.2 间接免疫荧光染色
2.3.3 电镜观察
2.4 结果
2.4.1 新城疫病毒感染诱导细胞死亡和线粒体损伤
2.4.2 新城疫病毒感染重塑线粒体的形态和诱导线粒体核周围聚集
2.4.3 新城疫病毒通过诱导线粒体核周围聚集,增加线粒体与内质网间的接触互作
2.5 本章讨论
2.6 本章小结
第三章 NDV感染通过自噬溶酶体和泛素蛋白酶体途径调控线粒体的融合-分裂稳态
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞系、病毒和质粒
3.2.2 抗体和酶
3.3 实验方法
3.3.1 转染
3.3.2 间接免疫荧光染色
3.3.3 电镜观察
3.3.4 免疫印迹
3.3.5 相对荧光定量
3.4 结果
3.4.1 新城疫病毒感染早期诱导线粒体融合过程抑制线粒体的分裂过程
3.4.2 新城疫病毒感染后期诱导线粒体的分裂过程抑制线粒体的融合过程
3.4.3 新城疫病毒改变线粒体融合-分裂稳态相关基因的mRNA水平
3.4.4 新城疫病毒主要通过自噬溶酶体途径降解线粒体的融合-分裂机器蛋白
3.5 本章讨论
3.6 本章小结
第四章 NDV通过完全线粒体自噬途径和内体溶酶体途径降解片段化线粒体
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 细胞系、病毒和质粒
4.2.2 抗体和药物
4.3 实验方法
4.3.1 转染
4.3.2 间接免疫荧光染色
4.3.3 电镜观察
4.3.4 免疫印迹
4.3.5 ATP含量的检测
4.4 结果
4.4.1 NDV感染晚期损坏线粒体的功能
4.4.2 NDV感染晚期诱导线粒体自噬
4.4.3 NDV感染晚期诱导完全的线粒体自噬
4.4.4 内体溶酶体途径参与降解NDV感染诱导的片段化线粒体
4.5 本章讨论
4.6 本章小结
第五章 新城疫病毒感染激活经典的Parkin-PINK1 信号调控线粒体自噬过程
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 细胞系、病毒和质粒
5.2.2 抗体
5.3 实验方法
5.3.1 转染
5.3.2 间接免疫荧光染色
5.3.3 免疫印迹
5.3.4 免疫共沉淀
5.4 结果
5.4.1 NDV感染激活经典的Parkin-PINK1 线粒体自噬信号
5.4.2 NDV感染能够诱导MFN2 蛋白的泛素化
5.4.3 接头蛋白p62/SQSTM1和NDP52/CALCOCO2 蛋白参与到降解片段化的线粒体过程
5.4.4 NDV感染通过降解片段化线粒体抑制MAVS依赖性先天性免疫反应
5.5 本章讨论
5.6 本章小结
第六章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3694108
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 细胞自噬简述
1.1.1 细胞自噬分类
1.1.2 细胞自噬信号调控简述
1.1.3 选择性自噬简述
1.2 病毒感染劫持细胞自噬简述
1.2.1 细胞自噬正向调控病毒感染
1.2.2 细胞自噬负向调控病毒感染
1.3 线粒体简述
1.3.1 线粒体结构和功能
1.3.2 线粒体稳态调控的分子动力学
1.3.3 经典线粒体自噬信号的调控简述
1.4 病毒感染劫持线粒体促进病毒复制机制
1.4.1 病毒感染改变线粒体的空间分布,增强了线粒体的生物学功能
1.4.2 病毒通过扰乱线粒体融合-分裂稳态调控先天性免疫,促进病毒复制
1.4.3 抑制了MAVS依赖的先天性免疫反应
1.4.4 线粒体在病毒感染过程中的间接性作用
1.5 溶瘤性病毒简述
1.6 本研究目的意义
第二章 新城疫病毒感染扰乱线粒体融合-分裂稳态
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 细胞系、病毒和质粒
2.2.2 实验试剂
2.3 实验方法
2.3.1 转染
2.3.2 间接免疫荧光染色
2.3.3 电镜观察
2.4 结果
2.4.1 新城疫病毒感染诱导细胞死亡和线粒体损伤
2.4.2 新城疫病毒感染重塑线粒体的形态和诱导线粒体核周围聚集
2.4.3 新城疫病毒通过诱导线粒体核周围聚集,增加线粒体与内质网间的接触互作
2.5 本章讨论
2.6 本章小结
第三章 NDV感染通过自噬溶酶体和泛素蛋白酶体途径调控线粒体的融合-分裂稳态
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞系、病毒和质粒
3.2.2 抗体和酶
3.3 实验方法
3.3.1 转染
3.3.2 间接免疫荧光染色
3.3.3 电镜观察
3.3.4 免疫印迹
3.3.5 相对荧光定量
3.4 结果
3.4.1 新城疫病毒感染早期诱导线粒体融合过程抑制线粒体的分裂过程
3.4.2 新城疫病毒感染后期诱导线粒体的分裂过程抑制线粒体的融合过程
3.4.3 新城疫病毒改变线粒体融合-分裂稳态相关基因的mRNA水平
3.4.4 新城疫病毒主要通过自噬溶酶体途径降解线粒体的融合-分裂机器蛋白
3.5 本章讨论
3.6 本章小结
第四章 NDV通过完全线粒体自噬途径和内体溶酶体途径降解片段化线粒体
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 细胞系、病毒和质粒
4.2.2 抗体和药物
4.3 实验方法
4.3.1 转染
4.3.2 间接免疫荧光染色
4.3.3 电镜观察
4.3.4 免疫印迹
4.3.5 ATP含量的检测
4.4 结果
4.4.1 NDV感染晚期损坏线粒体的功能
4.4.2 NDV感染晚期诱导线粒体自噬
4.4.3 NDV感染晚期诱导完全的线粒体自噬
4.4.4 内体溶酶体途径参与降解NDV感染诱导的片段化线粒体
4.5 本章讨论
4.6 本章小结
第五章 新城疫病毒感染激活经典的Parkin-PINK1 信号调控线粒体自噬过程
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 细胞系、病毒和质粒
5.2.2 抗体
5.3 实验方法
5.3.1 转染
5.3.2 间接免疫荧光染色
5.3.3 免疫印迹
5.3.4 免疫共沉淀
5.4 结果
5.4.1 NDV感染激活经典的Parkin-PINK1 线粒体自噬信号
5.4.2 NDV感染能够诱导MFN2 蛋白的泛素化
5.4.3 接头蛋白p62/SQSTM1和NDP52/CALCOCO2 蛋白参与到降解片段化的线粒体过程
5.4.4 NDV感染通过降解片段化线粒体抑制MAVS依赖性先天性免疫反应
5.5 本章讨论
5.6 本章小结
第六章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3694108
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