LIF/LIFR基因的克

发布时间：2022-10-22 19:22

　　【目的】胚胎的附植是一个复杂的生理过程，受诸多因素的调控。白血病抑制因子（LIF）与其受体（LIFR）结合,在排卵、胚胎发育及胚胎附植等过程中起重要的调节作用。为进一步研究白血病抑制因子及其受体（LIF/LIFR）基因在雌性牦牛繁殖周期生殖中的作用，本研究拟克隆牦牛LIF和LIFR基因，对其中进行生物信息学分析，且对两个基因在雌性牦牛生殖器官中的表达进行研究。 【方法】基于印度水牛的LIF和家牛的LIFR基因的cDNA序列设计引物，通过RT-PCR方法克隆牦牛的LIF和LIFR基因序列，通过相关软件及网络资源对目的基因进行生物信息学分析，并结合RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR，对LIF和LIFR基因在牦牛各生殖器官中的表达进行检测。 【结果】本研究首次成功克隆了包含开放阅读框的牦牛LIF和LIFR基因序列。其中牦牛LIF cDNA序列得到635bp。克隆得到3329bp的牦LIFR cDNA序列。在牦牛生殖器官组织中表达研究显示，LIF和LIFR在牦牛的各个生殖器官均表达。 【结论】LIF和LIFR在进化中较为保守。与家牛、印度水牛具有很高的同源性达到99.5％... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
第一章 文献综述
    1. 哺乳动物胚胎附植
        1.1 附植的定义
        1.2 附植时间
        1.3 附植部位
        1.4 附植的过程
        1.5 胚泡附植的分子机制
    2.细胞凋亡
    3. 胚胎凋亡
    4.凋亡的检测
        4.1 细胞凋亡形态学分析
        4.2 细胞膜结构改变分析
        4.3 细胞膜表面结构分析
        4.4 细胞内组分改变
        4.5 细胞 DNA 含量分
        4.6 原位标记技术 ISEL
        4.7 原位缺口平移 ISNT
        4.8 DNA 降解分析
    5.细胞因子
        5.1 白血病抑制因子（LIF）及其受体（LIFR）
        5.2 白血病抑制因子在繁殖中的作用
    6.生物信息学
    7.本研究的意义
第二章 牦牛 LIF、LIFR 基因的克隆及生物信息学分析
    1.材料与方法
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 样品采集
            1.3.2 总 RNA 的提取与质量检测
            1.3.3 基因克隆
            1.3.4 生物信息学分析
    2.结果
        2.1 牦牛 RNA 质量的检测
        2.2 PCR 扩增
        2.3 基因重组子的鉴定
        2.4 牦牛 LIF/LIFR 基因克隆测序结果及生物性息学分析
        2.5 牦牛 LIF 基因生物信息分析结果
        2.6 牦牛 LIFR 基因生物信息分析结果
    3.讨论
第三章 LIF、LIFR 在雌性牦牛内生殖器官组织中的表达
    1.材料与方法
        1.1 材料
        1.2 实验方法
            1.2.1 样品采集
            1.2.2 总 RNA 提取
            1.2.3 RT-PCR 分析
            1.2.4 相对荧光定量分析 LIFR 的表达
    2.结果
        2.1 牦牛各组织总 RNA 提取及凝胶电泳分析
        2.2 在繁殖周期内生殖器官的表达
    3.讨论
参考文献
致谢
导师简介
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳动物附植前胚胎细胞凋亡的研究进展[J]. 罗婷,蒙丽娜,刘晓华,孙洪亮,陆凤花,石德顺.  中国畜牧兽医. 2012(11)
[2]细胞凋亡检测方法的研究进展[J]. 佟俊杰,张广耘,袁晓.  口腔医学. 2010(07)
[3]细胞凋亡常用检测方法的研究进展[J]. 郭延锋,高均伟,朱国坡,刘兴友.  中国畜牧兽医. 2010(02)
[4]我国牦牛资源现状及其产品开发利用前景分析[J]. 牛春娥,张利平,孙俊锋,高雅琴,曹健民.  安徽农业科学. 2009(17)
[5]中国牦牛业发展现状及对策分析[J]. 郭宪,阎萍,梁春年,裴杰,曾玉峰,包鹏甲.  中国牛业科学. 2009(02)
[6]哺乳动物着床前胚胎细胞凋亡的研究进展[J]. 张家新,李金泉.  黑龙江畜牧兽医. 2008(09)
[7]细胞凋亡的特征及其检测方法[J]. 刘海峰,孙文汇,高洪,严玉霖.  动物医学进展. 2008(03)
[8]提高牦母牛繁殖性能的研究[J]. 张君.  青海畜牧兽医杂志. 2007(03)
[9]牦牛繁殖科学研究进展[J]. 字向东,钟金城.  西南民族大学学报(自然科学版). 2007(01)
[10]小鼠早期胚胎发育过程中细胞凋亡及凋亡基因表达的检测[J]. 李威,王连卿,苏静艳,袁丽丽,严云勤.  细胞生物学杂志. 2006(04)

博士论文
[1]牦牛胚胎附植过程中细胞凋亡及其通路的研究[D]. 巨向红.甘肃农业大学 2006



本文编号：3696722