三种猪腹泻相关病原微芯片检测方法研究及初步应用

发布时间：2022-10-29 17:20

　　为同时快速筛查猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus, TGEV）、猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）以及猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）3种可致猪腹泻的猪病病原,本研究基于微芯片技术,针对3种病毒特异性基因分别建立微量实时荧光（RT-）PCR检测体系,并将其组合在微芯片上。结果显示,该方法可特异性检出以上3种病毒核酸,但不能检出本实验室保存的其他5种猪病病毒核酸,而且相互之间无交叉反应;灵敏度试验显示TGEV和PEDV检测灵敏度均可达到1TCID₅₀/0.1 mL,对于含PCV2全基因组质粒,检测极限为41 fg/μL。对237份送检样品的检测结果显示,PEDV和PCV2检出率分别为0.8%和7.2%,但未检出TGEV,与常规管式荧光（RT-）PCR检测结果一致。该项技术可大大降低筛查的试剂成本,因为每个反应池只需要1.2μL的（RT-）PCR试剂混合物,而且比传统的实时（RT-）PCR系统的热平衡和热均匀... 

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【文章目录】：
1 实验材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 病毒核酸及被检样品
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要设备
    1.2 实验方法
        1.2.1 引物的设计合成
        1.2.2 微芯片上样检测
        1.2.3 灵敏度试验
        1.2.4 特异性试验
        1.2.5 送检样品的检测
2 实验结果
    2.1 反应体系优化结果
    2.2 灵敏度试验结果
    2.3 特异性试验结果
    2.4 对送检样品的检测结果
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用[J]. 王慧珊,高志强,王金宝,张鹤晓,乔彩霞,吴亚琼,邢佑尚,朱淑芬.  中国动物检疫. 2011(10)



本文编号：3698108