TGEV单克隆抗体及抗原检测胶体金试纸条的制备
发布时间：2022-10-29 22:58
猪传染性胃肠炎（Porcine transmissible gastroenteritis,TGE）是猪的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病由猪传染性胃肠炎病毒（TGE virus,TGEV）引起,以严重的呕吐、腹泻及2周内仔猪高死亡率为特征。TGE与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪Delta冠状病毒及猪轮状病毒等引起的临床症状相似,临床鉴别诊断困难。胶体金免疫层析试纸具备适合兽医临床快速诊断,特异性高、操作简单等特点。已知TGEV N蛋白是TGEV抗原和抗体检测方法研究的重要靶蛋白。因此,本研究以N蛋白为靶蛋白,制备单克隆抗体,研制快速检测TGEV抗原的胶体金免疫层析试纸,旨在为TGE的快速诊断与防治提供重要技术支撑。本研究以弗氏佐剂乳化的重组TGEV N蛋白免疫3只雌性BALB/c小鼠,共免疫3次,间隔2周。第3次免疫后10天,经ELISA检测3只小鼠的血清特异性抗体效价在1:10240~1:20480之间,选取抗体效价为1:20480的小鼠于融合前用N蛋白进行腹腔冲击免疫。冲击免疫后第3天取小鼠脾细胞与杂交瘤细胞进行细胞融合,通过ELISA筛选分泌TGEV N蛋白特异性抗体的阳...
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
1 引言
1.1 猪传染性胃肠炎概述
1.1.1 流行特点
1.1.2 临床症状与病理变化
1.2 猪传染性胃肠炎病毒
1.2.1 基本生物学特征
1.2.2 分子生物学特征
1.3 实验室检测技术
1.3.1 病毒的分离鉴定
1.3.2 免疫荧光技术
1.3.3 酶联免疫吸附试验
1.3.4 聚合酶链式反应
1.4 疫苗
1.4.1 灭活疫苗
1.4.2 弱毒活疫苗
1.4.3 基因工程疫苗
1.5 防治
1.6 胶体金免疫层析技术
1.6.1 胶体金的特性及制备
1.6.2 免疫胶体金的制备
1.6.3 胶体金免疫层析技术的应用
1.7 研究的目的及意义
1.8 研究内容与技术路线
1.8.1 研究内容
1.8.2 技术路线
1.9 研究的目标
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 单克隆抗体制备用材料
2.1.2 胶体金免疫层析试验方法建立用材料
2.1.3 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 TGEV单克隆抗体的制备
2.2.2 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的制备与纯化鉴定
2.2.3 TGEV抗原检测胶体金试纸条的制备
3 结果
3.1 纯化的TGEV N蛋白
3.2 TGEV及其TCID50
3.3 TGEV抗体检测间接ELISA方法
3.4 融合前小鼠抗TGEV N蛋白血清抗体效价
3.5 细胞融合与获得的杂交瘤细胞株
3.6 单克隆抗体的类型
3.7 单克隆抗体的抗原识别表位
3.8 单克隆抗体的免疫活性
3.9 单抗2F5 能够与TGEV特异性结合
3.10 单克隆抗体的效价
3.11 纯化腹水的SDS-PAGE
3.12 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的效价
3.13 兔抗N蛋白多克隆抗体的免疫活性
3.14 胶体金标记多抗的最适pH值
3.15 胶体金标记TGEV多抗的最适浓度
3.16 检测线与质控线的工作浓度
3.17 试纸条的特异性鉴定
3.18 试纸条的敏感性检测
3.19 临床应用
4 讨论
4.1 重组TGEV N蛋白免疫抗原的制备及应用
4.2 TGEV N蛋白单克隆抗体的制备
4.3 金标抗体和检测用抗体的选择
4.4 TGEV抗原检测试纸条的问题
5 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]B细胞抗原表位预测方法的研究进展[J]. 马凡舒,张蕾,王洋,孙彦刚,闫喜军. 中国畜牧兽医. 2016(01)
[2]猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 王黎,李碧,周远成,朱玲,徐志文,郭万柱. 中国兽医学报. 2015(02)
[3]pH值对胶体金标记单克隆抗体性能的影响[J]. 孙园园,王云龙,李玉林,王继创,程蕾,邓黎黎. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(11)
[4]猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）福建分离株核衣壳蛋白基因（N）的克隆与表达分析[J]. 王劭,朱小丽,朱晓琳,陈少莺,林锋强,陈仕龙,程晓霞,李兆龙,江斌. 农业生物技术学报. 2013(01)
[5]猪流行性腹泻的研究进展[J]. 陈刚,李伟,张阳,吴昊,施慈,任晓峰,赵凯. 世界华人消化杂志. 2013(01)
[6]纳米金快速增敏免疫层析试验的研究[J]. 孙卫民,黄远荀,邓小燕,吴晓蔓. 现代预防医学. 2013(14)
[7]猪传染性胃肠炎诊断技术的研究进展[J]. 杨金生,刘云志,柴方红,黄海楠,任科研. 中国畜牧兽医. 2012(05)
[8]检测猪瘟病毒野毒株胶体金免疫层析方法的建立[J]. 王向鹏,孙元,杨增岐,仇华吉. 中国预防兽医学报. 2010(06)
[9]猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点分子特征分析[J]. 于天飞,朱红标,孙天国,张健,蔡雅璐,庞后琴,史小飞. 生物技术通报. 2010(03)
[10]免疫胶体金技术及其在临床诊断上的研究进展[J]. 许欣,王锋. 江西农业学报. 2009(06)
博士论文
[1]TGEV利用表皮生长因子受体调控肠上皮细胞微丝骨架及其入胞机制的研究[D]. 胡唯伟.南京农业大学 2016
[2]禽流感与新城疫胶体金免疫层析快速检测技术及初步应用研究[D]. 彭伏虎.华中农业大学 2008
[3]狂犬病毒G，N基因的表达、单克隆抗体制备与胶体金免疫层析检测试纸的研制[D]. 高明华.吉林大学 2007
[4]猪传染性胃肠炎病毒全基因组克隆及N蛋白的表达[D]. 宋振辉.四川农业大学 2006
硕士论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立与应用[D]. 徐向伟.南京农业大学 2016
[2]猪流行性腹泻病毒单克隆抗体胶体金免疫层析检测方法的建立[D]. 魏艳秋.河北农业大学 2015
本文编号：3698577
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
1 引言
1.1 猪传染性胃肠炎概述
1.1.1 流行特点
1.1.2 临床症状与病理变化
1.2 猪传染性胃肠炎病毒
1.2.1 基本生物学特征
1.2.2 分子生物学特征
1.3 实验室检测技术
1.3.1 病毒的分离鉴定
1.3.2 免疫荧光技术
1.3.3 酶联免疫吸附试验
1.3.4 聚合酶链式反应
1.4 疫苗
1.4.1 灭活疫苗
1.4.2 弱毒活疫苗
1.4.3 基因工程疫苗
1.5 防治
1.6 胶体金免疫层析技术
1.6.1 胶体金的特性及制备
1.6.2 免疫胶体金的制备
1.6.3 胶体金免疫层析技术的应用
1.7 研究的目的及意义
1.8 研究内容与技术路线
1.8.1 研究内容
1.8.2 技术路线
1.9 研究的目标
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 单克隆抗体制备用材料
2.1.2 胶体金免疫层析试验方法建立用材料
2.1.3 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 TGEV单克隆抗体的制备
2.2.2 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的制备与纯化鉴定
2.2.3 TGEV抗原检测胶体金试纸条的制备
3 结果
3.1 纯化的TGEV N蛋白
3.2 TGEV及其TCID50
3.3 TGEV抗体检测间接ELISA方法
3.4 融合前小鼠抗TGEV N蛋白血清抗体效价
3.5 细胞融合与获得的杂交瘤细胞株
3.6 单克隆抗体的类型
3.7 单克隆抗体的抗原识别表位
3.8 单克隆抗体的免疫活性
3.9 单抗2F5 能够与TGEV特异性结合
3.10 单克隆抗体的效价
3.11 纯化腹水的SDS-PAGE
3.12 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的效价
3.13 兔抗N蛋白多克隆抗体的免疫活性
3.14 胶体金标记多抗的最适pH值
3.15 胶体金标记TGEV多抗的最适浓度
3.16 检测线与质控线的工作浓度
3.17 试纸条的特异性鉴定
3.18 试纸条的敏感性检测
3.19 临床应用
4 讨论
4.1 重组TGEV N蛋白免疫抗原的制备及应用
4.2 TGEV N蛋白单克隆抗体的制备
4.3 金标抗体和检测用抗体的选择
4.4 TGEV抗原检测试纸条的问题
5 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]B细胞抗原表位预测方法的研究进展[J]. 马凡舒,张蕾,王洋,孙彦刚,闫喜军. 中国畜牧兽医. 2016(01)
[2]猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 王黎,李碧,周远成,朱玲,徐志文,郭万柱. 中国兽医学报. 2015(02)
[3]pH值对胶体金标记单克隆抗体性能的影响[J]. 孙园园,王云龙,李玉林,王继创,程蕾,邓黎黎. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(11)
[4]猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）福建分离株核衣壳蛋白基因（N）的克隆与表达分析[J]. 王劭,朱小丽,朱晓琳,陈少莺,林锋强,陈仕龙,程晓霞,李兆龙,江斌. 农业生物技术学报. 2013(01)
[5]猪流行性腹泻的研究进展[J]. 陈刚,李伟,张阳,吴昊,施慈,任晓峰,赵凯. 世界华人消化杂志. 2013(01)
[6]纳米金快速增敏免疫层析试验的研究[J]. 孙卫民,黄远荀,邓小燕,吴晓蔓. 现代预防医学. 2013(14)
[7]猪传染性胃肠炎诊断技术的研究进展[J]. 杨金生,刘云志,柴方红,黄海楠,任科研. 中国畜牧兽医. 2012(05)
[8]检测猪瘟病毒野毒株胶体金免疫层析方法的建立[J]. 王向鹏,孙元,杨增岐,仇华吉. 中国预防兽医学报. 2010(06)
[9]猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点分子特征分析[J]. 于天飞,朱红标,孙天国,张健,蔡雅璐,庞后琴,史小飞. 生物技术通报. 2010(03)
[10]免疫胶体金技术及其在临床诊断上的研究进展[J]. 许欣,王锋. 江西农业学报. 2009(06)
博士论文
[1]TGEV利用表皮生长因子受体调控肠上皮细胞微丝骨架及其入胞机制的研究[D]. 胡唯伟.南京农业大学 2016
[2]禽流感与新城疫胶体金免疫层析快速检测技术及初步应用研究[D]. 彭伏虎.华中农业大学 2008
[3]狂犬病毒G，N基因的表达、单克隆抗体制备与胶体金免疫层析检测试纸的研制[D]. 高明华.吉林大学 2007
[4]猪传染性胃肠炎病毒全基因组克隆及N蛋白的表达[D]. 宋振辉.四川农业大学 2006
硕士论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立与应用[D]. 徐向伟.南京农业大学 2016
[2]猪流行性腹泻病毒单克隆抗体胶体金免疫层析检测方法的建立[D]. 魏艳秋.河北农业大学 2015
本文编号：3698577
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