吕氏泰勒虫与尤氏泰勒虫蛋白组学初探

发布时间：2022-10-30 09:47

　　泰勒虫是一种经由蜱传播的一类血液寄生原虫,它的爆发会给全球畜牧业造成了严重的经济损失。在泰勒虫的流行病学调查、分类、以及致病性研究等方面,相关报道较多,而在其基因组,转录组,蛋白组等方面的文献报道极少。本研究选取了6株致病力较强的羊泰勒虫种株作为研究对象进行蛋白质组学分析,通过iTRAQ技术测定了吕氏泰勒虫及尤氏泰勒虫种内及种间的差异表达蛋白,并针对一些重要的功能性蛋白进行了初步分析及转录水平的验证,分别提交并公布了吕氏泰勒虫及尤氏泰勒虫的全蛋白质组学数据库,并针对一些与泰勒虫能量代谢相关的蛋白进行了讨论。为此我们进行了以下研究工作： 1、对吕氏泰勒虫与尤氏泰勒虫两个种的六个地方株进行了裂殖子的培养；随后利用所建立的免疫亲和层析柱的纯化方法对虫体进行提纯,尽可能除去红细胞碎片及其他杂质,从而得到较为纯净的蛋白质组学研究材料。随后,建立了一种能够同时鉴定三种羊泰勒虫的多重PCR方法,对所培养的虫种进行了快速的鉴定与分类。 2、利用iTRAQ技术对两种羊泰勒虫的差异表达蛋白进行了分析,超过670个蛋白被鉴定出,将这些蛋白按照功能进行分类,其中与细胞进程相关蛋白有29.78%,与... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 病原特征
    1.2 临床及病理变化
    1.3 泰勒虫裂殖子的检测
    1.4 泰勒虫裂殖子的纯化
    1.5 蛋白质鉴定
    1.6 蛋白全谱分析
    1.7 差异蛋白分析
    1.8 蛋白质组学在寄生虫方面的应用
第二章 吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫的鉴定、增殖与纯化
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 虫种资源
        2.1.4 实验动物
    2.2 方法
        2.2.1 泰勒虫的增殖
        2.2.2 多重PCR鉴定方法的建立
            2.2.2.1 引物设计
            2.2.2.2 多重PCR特异性及灵敏性检测
            2.2.2.3 多重PCR反应条件优化
            2.2.2.4 PCR产物检测
        2.2.3 免疫亲和层析纯化泰勒虫裂殖子方法的建立
            2.2.3.1 抗体的纯化
            2.2.3.2 抗体的上样前处理
            2.2.3.3 抗体的偶联
            2.2.3.4 样品预处理
            2.2.3.5 裂殖子的纯化
            2.2.3.6 纯化效果检测
    2.3 结果
        2.3.1 虫体的增殖
        2.3.2 多重PCR特异性检测
        2.3.3 多重PCR灵敏性检测
        2.3.4 反应条件的优化
        2.3.5 野外样品检测
        2.3.6 抗体纯化效果
        2.3.7 虫体纯化效果
    2.4 讨论
第三章 吕氏泰勒虫与尤氏泰勒虫裂殖子的差异蛋白组学鉴定与功能分析
    3.1 材料
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 主要试剂
    3.2 方法
        3.2.1 虫体蛋白质提取
        3.2.2 Bradford定量
        3.2.3 蛋白电泳
        3.2.4 样品的酶解
        3.2.5 iTRAQ标记
        3.2.6 SCX分离
        3.2.7 基于Triple TOF 5600的LC-ESI-MSMS分析
        3.2.8 Mascot搜索
        3.2.9 GO注释
        3.2.10 COG注释
        3.2.11 Pathway代谢通路注释
    3.3 结果
        3.3.1 泰勒虫蛋白提取
        3.3.2 Bradford标准曲线制作
        3.3.3 泰勒虫蛋白质鉴定
            3.3.3.1 数据库选择
            3.3.3.2 Mascot搜索
            3.3.3.3 蛋白鉴定基本信息
        3.3.4 氏泰勒虫种内差异蛋白分析
            3.3.4.1 氏泰勒虫种内差异蛋白分布
            3.3.4.2 吕氏泰勒虫种内差异蛋白的功能聚类
        3.3.5 尤氏氏泰勒虫种内差异蛋白分析
            3.3.5.1 尤氏泰勒虫种内差异蛋白分布
            3.3.5.2 尤氏泰勒虫种内差异蛋白的功能聚类
        3.3.6 两种泰勒虫种间蛋白差异性分析
        3.3.7 差异蛋白的功能聚类
        3.3.8 细胞通路分析
        3.3.9 在转录水平对重点差异蛋白表达量验证
    3.4 讨论
第四章 吕氏泰勒虫与尤氏泰勒虫裂殖子的蛋白全谱分析
    4.1 材料
        4.1.1 主要仪器
        4.1.2 主要试剂
    4.2 方法
        4.2.1 虫体蛋白质提取
        4.2.2 Bradford定量
        4.2.3 SDS电泳
        4.2.4 蛋白质胶内酶解
        4.2.5 肽段提取
        4.2.6 基于LTQ-Orbitrap CID的LC-ESI-MS/MS分析
        4.2.7 Mascot搜索
    4.3 结果
        4.3.1 泰勒虫蛋白提取
        4.3.2 Bradford标准曲线制作
        4.3.3 蛋白鉴定结果
            4.3.3.1 肽段匹配误差分析
            4.3.3.2 蛋白鉴定覆盖度分布
            4.3.3.3 鉴定肽段序列长度分布
        4.3.4 GO分析
            4.3.4.1 吕氏泰勒虫GO分析
            4.3.4.2 尤氏泰勒虫GO分析
        4.3.5 GOG分析
            4.3.5.1 吕氏泰勒虫GOG分析
            4.3.5.2 尤氏泰勒虫GOG分析
    4.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]急性脊髓损伤后差异蛋白的表达[J]. 徐磊磊,周义军,宋兴华,丁俐文,陈江涛,王翀,甘雨灵,朱晓萌.  中国组织工程研究. 2013(41)
[2]纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原[J]. 方正明,王升,苏斌涛,宫念樵,刘文琪,明长生.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2010(05)

博士论文
[1]东方蜜蜂抗螨相关基因的筛选及初步验证[D]. 殷玲.扬州大学 2013
[2]柞蚕微孢子虫检测及感染柞蚕中肠转录组及蛋白质组学研究[D]. 姜义仁.沈阳农业大学 2012



本文编号：3698661