硒蛋白W对鸡免疫机能的影响

发布时间：2022-10-31 21:27

　　硒是动物体生命活动中所必需的微量元素，对动物体正常生理功能的发挥起着重要作用。硒与人和动物的健康密切相关，硒缺乏能够引起人的地方病——克山病，及牲畜的白肌病等，硒对免疫系统功能的正常发挥也是至关重要的。硒在动物体内主要是以硒蛋白的形式存在，并且主要通过硒蛋白来发挥其在有机体内的生物学作用。硒蛋白W（Selenoprotein W，SelW）是一种小的硒蛋白，在硒添加动物的各种组织中均有发现，在哺乳动物的肌肉、脾脏和脑组织中水平最高。动物体内的硒水平和硒摄入量在一定程度调控硒蛋白的表达。目前关于SelW的研究主要集中在哺乳动物，鸡缺硒时免疫功能降低，免疫器官发生变性坏死，但SelW在禽类免疫功能中的作用还是未知的。本试验通过复制不同硒水平鸡模型及建立体外培养鸡淋巴细胞硒蛋白W敲低模型的基础上，应用实时荧光定量PCR法、TUNEL法等，检测了鸡免疫器官脾脏、胸腺、法氏囊和体外培养淋巴细胞中SelW、iNOS、COX-2、NF-κB、PTGE、BCl-2、Capase-3、Bax、P53、Bak-1、IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、... 

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【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 硒与硒蛋白
    1.2 硒对动物免疫功能的影响
        1.2.1 硒对动物细胞免疫功能的影响
        1.2.2 硒对动物体液免疫功能的影响
        1.2.3 硒对动物非特异性免疫功能的影响
    1.3 硒蛋白 W
        1.3.1 SelW 的生物学特性
        1.3.2 硒对 SelW 的调控
        1.3.3 SelW 的功能
    1.4 RNA 干扰
        1.4.1 RNAi 的抑制机理
        1.4.2 RNAi 技术的功能
        1.4.3 RNAi 的影响因素
    1.5 实验的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 主要仪器和试剂
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要化学与生物试剂
        2.1.3 主要试剂的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 实验动物及分组
        2.2.2 组织样品的采集与处理
        2.2.3 鸡脾脏淋巴细胞的制备
        2.2.4 不同硒浓度对鸡脾脏淋巴细胞的处理
        2.2.5 硒及过氧化氢对鸡脾脏淋巴细胞的处理
        2.2.6 qPCR 对目的基因 mRNA 水平检测方法的建立
        2.2.7 SelW RNAi 条件的优化
        2.2.8 鸡脾脏淋巴细胞 SelW RNAi 试验
        2.2.9 试验数据的分析与统计
3 结果与分析
    3.1 硒对脾脏、胸腺、法氏囊细胞凋亡的 TUNEL 检测结果
    3.2 淋巴细胞过氧化氢 LD50的测定和形态学观察
    3.3 不同浓度 Se 和 H2O2对淋巴细胞相对存活率影响的测定
    3.4 不同浓度 Se 和 H2O2处理淋巴细胞的 AO/EB 双染检测结果
    3.5 目的基因实时 PCR 检测方法的建立
    3.6 不同日龄鸡脾脏、胸腺、法氏囊 SelW、相关炎症基因、凋亡基因和细胞因子mRNA 表达水平影响的检测结果
        3.6.1 不同日龄鸡脾脏、胸腺、法氏囊 SelW mRNA 表达水平影响的检测结果
        3.6.2 不同日龄鸡脾脏、胸腺、法氏囊 iNOS、COX-2、NF-κB 及 PTGE mRNA 表达水平影响的检测结果
        3.6.3 不同日龄鸡脾脏、胸腺、法氏囊 Bcl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 及 P53 mRNA表达水平影响的检测结果
        3.6.4 不同日龄鸡脾脏、胸腺、法氏囊 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α mRNA 表达水平影响的检测结果
    3.7 鸡脾脏淋巴细胞 SelW、相关炎症基因、凋亡基因和细胞因子 mRNA 表达水平影响的检测结果
        3.7.1 鸡脾脏淋巴细胞 SelW mRNA 表达影响的检测结果
        3.7.2 鸡脾脏淋巴细胞 iNOS、NF-κB、PTGE 及 COX-2 mRNA 表达影响的检测结果
        3.7.3 鸡脾脏淋巴细胞 BCl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 及 P53、表达影响的检测结果
        3.7.4 鸡脾脏淋巴细胞 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α mRNA 表达影响的检测结果
    3.8 SelW RNAi 条件的建立和试验结果
        3.8.1 S-RNA 的转染效率
        3.8.2 SelW RNAi 后淋巴细胞 AO/EB 双染检测结果
        3.8.3 SelW RNAi 后 SelW 基因 mRNA 表达水平的检测结果
        3.8.4 SelW RNAi 后相关炎症基因 iNOS、COX-2、NF-κB 和 PTGE mRNA 表达水平的检测结果
        3.8.5 SelW RNAi 后相关凋亡基因 BCl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 及 P53 mRNA 表达水平的检测结果
        3.8.6 SelW RNAi 后相关细胞因子 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α mRNA 表达水平的检测结果
4 讨论
    4.1 硒对鸡脾脏、胸腺、法氏囊及脾脏淋巴细胞 SelW 表达的影响
    4.2 体外培养脾脏细胞 SelW 敲低模型的建立
    4.3 SelW 对脾脏、胸腺、法氏囊及淋巴细胞细胞因子 IL-1R、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL -10、IL-12β、IL-17、INF-γ和 TNF-α表达的影响
    4.4 SelW 对鸡脾脏、胸腺和法氏囊及淋巴细胞 iNOS、COX-2、NF-κB 和 PTGE 表达的影响
    4.5 SelW 对脾脏、胸腺、法氏囊及淋巴细胞细胞凋亡的影响
    4.6 SelW 对脾脏、胸腺、法氏囊及淋巴细胞 BCl-2、Capase-3、Bak-1、Bax 和 P53 表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
附录：试验结果附图
攻读博士期间发表的博士论文


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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[3]RNAi技术在抑制HBV复制和表达中的应用[D]. 张宏斌.第一军医大学 2006
[4]幼鲤硒缺乏症及其机制和硒需要量研究[D]. 金明昌.四川农业大学 2007

硕士论文
[1]鸡SelW过表达CHO-K1细胞系的构建及其抗氧化功能的研究[D]. 韩艳辉.东北农业大学 2012
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[3]不同硒源对肉仔鸡生产性能的影响[D]. 方国跃.湖南农业大学 2003



本文编号：3699747