广灵驴ADD1基因的克隆和序列分析与组织表达

发布时间：2022-11-04 19:21

　　运用RT–PCR方法,克隆广灵驴的ADD1基因的CDS区,对其进行序列分析,并通过qRT–PCR技术鉴定ADD1基因在广灵驴心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和背最长肌中的相对表达水平。结果表明:广灵驴ADD1基因完整的CDS序列全长为2 223 bp,可编码740个氨基酸,序列已提交到NCBI,登录号为MN₁66472,其核苷酸序列与马的核苷酸序列的同源性最高,达99.6%;生物信息学预测ADD1蛋白为结构稳定的亲水性蛋白,理论等电点为5.58,二级结构主要以α–螺旋和无规则卷曲为主,存在1个Ⅱ类醛缩酶和内收蛋白N端超家族结构域,该蛋白没有信号肽及跨膜区域,主要定位在细胞核中,序列中共存在88个磷酸化位点,69个O–糖基化位点和3个N–糖基化位点;实时荧光定量检测结果表明,ADD1基因在广灵驴的6种组织中均有表达,但存在差异,在背最长肌中表达量最丰富,在肝脏中表达量最低。 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试验动物
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 引物的设计与合成
        1.2.2 总RNA提取和c DNA合成
        1.2.3 PCR扩增与克隆测序
        1.2.4 序列分析
        1.2.5 实时荧光定量PCR扩增
2 结果与分析
    2.1 广灵驴ADD1基因的序列
    2.2 广灵驴ADD1基因及其编码蛋白序列的同源性比对分析结果
    2.3 ADD1基因的系统进化树分析结果
    2.4 广灵驴ADD1蛋白分子特征的预测结果
        2.4.1 氨基酸序列的理化性质和亲/疏水性
        2.4.2 ADD1蛋白的二级结构和三级结构
        2.4.3 ADD1蛋白的保守域
        2.4.4 ADD1蛋白的跨膜结构和信号肽及亚细胞定位
        2.4.5 ADD1蛋白的修饰结构
    2.5 ADD1基因在广灵驴不同组织中的表达情况
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪附红细胞体MSG1基因的克隆与生物信息学分析[J]. 贾杏林,邹亚文,刘思远,程天印.  湖南农业大学学报(自然科学版). 2016(05)
[2]人白细胞介素-29的生物信息学分析[J]. 郑海军,朱荣,葛春蕾,蔡鲜,徐望,陈伟,陆源.  中国生物制品学杂志. 2013(02)
[3]磷酸化蛋白质分析技术在蛋白质组研究中的应用[J]. 王京兰,钱小红.  分析化学. 2005(07)

博士论文
[1]鸡肌肉生长相关基因的表达与肌苷酸关键酶基因网络调控的构建[D]. 栾德琴.扬州大学 2012

硕士论文
[1]肉鸡Ex-FABP和ADD1基因的遗传多态性及其组织表达谱分析[D]. 杨娟娟.南京农业大学 2011



本文编号：3701187