戊型肝炎病毒感染对肠道黏膜免疫的影响

发布时间：2022-11-05 05:05

　　为了进一步揭示戊型肝炎病毒（HEV）与肠道黏膜免疫屏障的相互作用,本研究应用新西兰大白兔及长爪沙鼠作为HEV的感染的动物模型,目标锁定HEV相关抗原在肠道组织中的定位及其对肠道黏膜免疫的影响,采用组织病理学、组织细胞化学、免疫组织化学、PCR等方法,全面系统地观察兔及沙鼠感染HEV后,肠道结构,肠道黏膜免疫相关细胞的数量及黏膜免疫相关因子表达,揭示了HEV侵入过程中肠道免疫细胞间及局部黏膜免疫功能之间的关系,进而阐明黏膜免疫相关细胞和分子在HEV感染中的功能作用。试验结果如下： 1、兔源HEV感染家兔试验兔源HEV腹腔感染兔后,呈现不同的感染类型,感染后血清、粪便均可检测到]HEV RNA,血清中可检测到HEV ORF2抗原,同时肝脏也表现出与人HEV感染相似的病理变化；HEV感染兔全身组织器官HEV RNA及ORF2抗原检测结果显示,兔源HEV RNA及ORF2抗原可在感染兔不同组织器官（肝脏、脾脏、肺脏、淋巴结、十二指肠、空肠、回肠、圆小囊、蚓突）中分布,并且当粪便内存在HEV RNA时,肠道及肠相关淋巴组织可呈HEV抗原阳性；免疫组织化学观察结果表明：HEV ORF2抗原... 

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    一 分子病毒学
        1 分类学
        2 分子形态学及理化特征
        3 基因组
        4 病毒蛋白
        5 病毒的复制周期
    二 流行病学
        1 HEV的分布
            1.1 HEV的地理分布
            1.2 HEV的基因型分布
        2 动物宿主及种间流行
            2.1 猪的HEV流行
            2.2 兔的HEV流行
            2.3 其它动物HEV的流行
        3 HEV的传播途径
            3.1 粪口途径传播
            3.2 血液传播
            3.3 直接接触感染动物传播
    三 HEV的临床症状及病理变化
    四 HEV的动物模型
        1 非人灵长类动物模型
        2 猪动物模型
        3 鼠动物模型
        4 兔动物模型
    五 HEV感染的靶器官
    六 肠道黏膜免疫
        1 肠道的结构
            1.1 肠道组织结构特点
            1.2 肠道绒毛长度
            1.3 肠道隐窝深度
            1.4 肠道上皮细胞
        2 肠道的屏障功能
            2.1 肠道物理屏障
            2.2 肠道的黏膜免疫屏障
            2.3 肠薪膜生态屏障
        3 肠道黏膜免疫与病毒
        4 HEV及与肠道的关系
    七 本研究的目的与意义
第二章 兔源HEV RNA及抗原在兔全身组织器官的分布与定位
    前言
    试验一 兔源HEV灌胃及腹腔攻毒的比较
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 标准品的制备与鉴定
            2.2 标准曲线的制备
            2.3 病毒悬液中的HEV载量的测定
            2.4 攻毒后兔粪便中HEV RNA的检测结果
            2.5 攻毒后兔肝脏中HEV RNA的检测结果
        3 讨论
    试验二 兔源HEV腹腔注射攻毒动物模型的探讨
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 临床观察结果
            2.2 攻毒后兔血清及粪便中HEV-RNA的检测结果
            2.3 攻毒后兔血清中抗原及抗体的检测
            2.4 肝脏组织学观察
        3 讨论
    试验三 兔源HEV RNA及抗原在兔全身组织器官中的分布与定位
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2. 结果
            2.1 试验兔组织与器官中HEV RNA的检测
            2.2 试验兔组织与器官中ORF2抗原的检测
        3. 讨论
    试验四 HEV ORF2及ORF3抗原在感染兔肠道中的定位
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2. 结果
            2.1 HEV ORF2抗原在肠道及肠相关淋巴组织的定位
            2.2 HEV ORF3抗原在肠道及肠相关淋巴组织的定位
        3. 讨论
    小结
第三章 猪源HEV人工感染对沙鼠肠道黏膜免疫的影响
    前言
    试验一 沙鼠肠道中HEV RNA及抗原的分布与定位
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 临床观察结果
            2.2 沙鼠粪便中HEV RNA的检测
            2.3 沙鼠肠道中HEV RNA的检测
            2.4 沙鼠肠道中HEV ORF2抗原的分布
        3 讨论
    试验二 猪源HEV感染对沙鼠肠道形态及结构的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 HEV感染对沙鼠肠道结构的影响
            2.2 HEV感染对沙鼠各段肠道绒毛长度的影响
            2.3 HEV感染对沙鼠各段肠道隐窝深度的影响
            2.4 HEV感染对沙鼠肠道杯状细胞的影响
            2.5 HEV感染对沙鼠肠道基底膜的影响
        3 讨论
    试验三 猪源HEV感染对沙鼠黏膜免疫相关功能的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 HEV感染对肠道派尔氏结数量的影响
            2.2 HEV感染对沙鼠肠道上皮内淋巴细胞数量的影响
            2.3 HEV感染对沙鼠肠道SIgA的影响
            2.4 HEV感染对沙鼠肠道肥大细胞数量的影响
            2.5 HEV感染对沙鼠肠绒毛树突状细胞的影响
        3 讨论
    小结
第四章 兔戊型肝炎病毒(HEV)活体肠袢结扎感染试验
    前言
    试验一 兔活体肠袢结扎HEV感染试验
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 兔活体肠袢结扎及攻毒试验
            1.3 样品收集
            1.4 ELISA检测血清中抗原
            1.5 免疫组织化学检测组织中ORF2抗原
            1.6 活体结扎兔圆小囊淋巴细胞增殖活性测定
        2 结果
            2.1 活体结扎肠系膜静脉血清抗原检测
            2.2 活体结扎回肠组织HEV ORF2免疫组织化学染色结果
            2.3 活体结扎圆小囊组织HEV ORF2免疫组织化学染色结果
            2.4 HEV对活体结扎兔圆小囊内T淋巴细胞增殖的影响
        3 讨论
    试验二 IgA与HEV相互作用初探
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 攻毒
            1.3 样品收集
            1.5 免疫组织化学检测回肠及圆小囊中ORF2抗原
        2 结果
            2.1 回肠HEV ORF2免疫组织化学染色
            2.2 圆小囊HEV ORF2免疫组织化学染色
        3 讨论
    小结
结论
本研究的创新点
参考文献
图版与说明
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
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[3]辣椒素对湘黄鸡肠道绒毛长度及微生态的研究[J]. 钟金凤,何华西,许美解,刘小飞.  饲料研究. 2010(07)
[4]免疫组织化学法检测北京地区牛肝脏中戊型肝炎病毒抗原[J]. 尹君,佘锐萍,李睿文,孙泉,毛晶晶,于品,吕东强,潘亚涛.  动物医学进展. 2010(S1)
[5]犬肝脏中戊型肝炎病毒抗原的检测及组织病理学观察[J]. 李睿文,周寅,佘锐萍,李丰昌,尹君,毛晶晶,孙泉.  动物医学进展. 2010(S1)
[6]MTT法和CCK-8法检测悬浮细胞增殖的比较[J]. 侯春梅,李新颖,叶伟亮,曹曦元,肖鹤,黎燕.  军事医学科学院院刊. 2009(04)
[7]肠功能恢复汤对感染性多器官功能障碍综合征大鼠肠黏膜损伤的保护作用[J]. 王春荣,刘学飞,程永刚.  郑州大学学报(医学版). 2008(06)
[8]屠宰猪肝脏中戊型肝炎病毒（HEV）的检测及组织病理学观察[J]. 王英华,韦海涛,佘锐萍,赵景义,李文贵,李秀敏,刘利强,韩德平,王德成,于品,孙泉.  农业生物技术学报. 2008(03)
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本文编号：3701969