结核分枝杆菌蛋白Rv2185c和Rv3763调控NF-κB活性的分子机制初步研究
发布时间：2022-11-05 10:16
结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。该病是目前世界上单一致病菌感染导致病死率最高的疾病之一。近年来随着人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）的广泛流行以及多重耐药菌株的出现使得结核病变的复杂和难以防控。 NF-κB （nuclear factor-KB）是广泛存在于各种类型细胞中的一种转录因子,调控许多基因的转录,在免疫应答、炎症反应和细胞凋亡中发挥重要作用。 MTB致病机制复杂,分泌蛋白、脂蛋白、跨膜蛋白等介导细菌与宿主的相互作用,与宿主接触过程中能破坏宿主组织,引起一系列级联反应,在MTB致病过程中起重要作用,并影响宿主免疫防御。MTB能通过调节NF-κB活性来调节细胞的坏死和凋亡,然而具体的机制不是很清楚。本研究以NF-κB信号转导途径为切入点,筛选调控NF-κB的MTB分泌蛋白、脂蛋白、膜蛋白,分析其调控NF-κB的信号转导途径以及生物学意义,从而为进一步阐明结核分枝杆菌的致病机制和免疫机理奠定基础。主要研究内容如下： 1....
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第1章 文献综述
1.1 结核病简介
1.2 结核分枝杆菌分子生物学特征
1.3 天然免疫简介
1.4 结核分枝杆菌与天然免疫
1.4.1 Toll样受体
1.4.2 NOD2和NOD样受体
1.4.3 炎症小体
1.4.4 C型凝集素受体
1.4.5 胱天蛋白酶募集域蛋白9
1.4.6 维生素D
1.4.7 Ⅰ型干扰素
1.4.8 自然杀伤细胞
1.5 NF-κB信号转导途径
1.5.1 NF-κB及其相关分子
1.5.2 NF-κB激活的分子机制
1.5.3 NF-κB激活的上游信号转导途径
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 试验材料
3.1.1 菌株与细胞
3.1.2 质粒与载体
3.1.3 工具酶及主要试剂
3.1.4 培养基和抗生素的其配制
3.1.5 主要缓冲液和试剂及其配制
3.1.6 主要实验仪器及设备
3.1.7 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 候选目的蛋白基因的PCR扩增
3.2.2 PCR产物或酶切产物回收与纯化
3.2.3 外源DNA片段与质粒载体的连接反应
3.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
3.2.5 连接产物的转化
3.2.6 质粒的制备与鉴定
3.2.7 质粒转染(脂质体介导转染法)
3.2.8 双荧光素酶检测实验
3.2.9 Western Blot样品准备
第4章 结果与分析
4.1 目的基因的选择
4.2 真核表达质粒的构建
4.3 调控NF-κB活性的结核分枝杆菌蛋白的筛选
4.4 MTB Rv2185c促进NF-κB活化的分子机制研究
4.4.1 MTB Rv2185c促进NF-κB活化呈剂量依赖性和细胞特异性
4.4.2 MTB Rv2185c促进NF-κB活化的重要区域的确定
4.4.3 MTB Rv2185c促进p65磷酸化
4.5 MTB Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化的分子机制研究
4.5.1 MTB Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化呈剂量依赖性
4.5.2 MTB Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化的重要区域的确定
4.5.3 MTB Rv3763蛋白抑制TNF-α诱导的p65磷酸化
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 目的基因的选择
5.1.2 调控NF-κB活性的MTB蛋白筛选
5.1.3 Rv2185c促进NF-κB活化的分子机制初步研究
5.1.4 Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化的分子机制初步研究
5.2 结论
参考文献
附录1 PCR扩增引物及相应的酶切位点
附录2 调控NF-κB活性的结核分枝杆菌蛋白初步筛选结果
附录3 扩增MTB Rv2185c基因突变体的引物序列
附录4 扩增MTB Rv3763基因突变体的引物序列
致谢
本文编号：3702423
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第1章 文献综述
1.1 结核病简介
1.2 结核分枝杆菌分子生物学特征
1.3 天然免疫简介
1.4 结核分枝杆菌与天然免疫
1.4.1 Toll样受体
1.4.2 NOD2和NOD样受体
1.4.3 炎症小体
1.4.4 C型凝集素受体
1.4.5 胱天蛋白酶募集域蛋白9
1.4.6 维生素D
1.4.7 Ⅰ型干扰素
1.4.8 自然杀伤细胞
1.5 NF-κB信号转导途径
1.5.1 NF-κB及其相关分子
1.5.2 NF-κB激活的分子机制
1.5.3 NF-κB激活的上游信号转导途径
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 试验材料
3.1.1 菌株与细胞
3.1.2 质粒与载体
3.1.3 工具酶及主要试剂
3.1.4 培养基和抗生素的其配制
3.1.5 主要缓冲液和试剂及其配制
3.1.6 主要实验仪器及设备
3.1.7 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 候选目的蛋白基因的PCR扩增
3.2.2 PCR产物或酶切产物回收与纯化
3.2.3 外源DNA片段与质粒载体的连接反应
3.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
3.2.5 连接产物的转化
3.2.6 质粒的制备与鉴定
3.2.7 质粒转染(脂质体介导转染法)
3.2.8 双荧光素酶检测实验
3.2.9 Western Blot样品准备
第4章 结果与分析
4.1 目的基因的选择
4.2 真核表达质粒的构建
4.3 调控NF-κB活性的结核分枝杆菌蛋白的筛选
4.4 MTB Rv2185c促进NF-κB活化的分子机制研究
4.4.1 MTB Rv2185c促进NF-κB活化呈剂量依赖性和细胞特异性
4.4.2 MTB Rv2185c促进NF-κB活化的重要区域的确定
4.4.3 MTB Rv2185c促进p65磷酸化
4.5 MTB Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化的分子机制研究
4.5.1 MTB Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化呈剂量依赖性
4.5.2 MTB Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化的重要区域的确定
4.5.3 MTB Rv3763蛋白抑制TNF-α诱导的p65磷酸化
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 目的基因的选择
5.1.2 调控NF-κB活性的MTB蛋白筛选
5.1.3 Rv2185c促进NF-κB活化的分子机制初步研究
5.1.4 Rv3763抑制TNF-α诱导的NF-κB活化的分子机制初步研究
5.2 结论
参考文献
附录1 PCR扩增引物及相应的酶切位点
附录2 调控NF-κB活性的结核分枝杆菌蛋白初步筛选结果
附录3 扩增MTB Rv2185c基因突变体的引物序列
附录4 扩增MTB Rv3763基因突变体的引物序列
致谢
本文编号：3702423
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