A型口蹄疫病毒前导蛋白SAP域突变对其致病性和免疫应答的影响

发布时间：2022-11-06 12:19

　　口蹄疫是引起偶蹄动物的一种急性、热性、接触性传染病。防控FMD主要技术手段是疫苗免疫,由于FMDV自然属性限制,导致部分疫苗毒株生产性能不高,免疫效力低下。为解决疫苗生产中生产滴度较低、病变时间不稳定的问题,本实验室利用反向遗传技术获得了嵌合毒株rA-WT （Zheng, Guo et al.2013）。该嵌合毒株解决了这一难题,提高了疫苗生产滴度、产量和免疫效力。但该毒株生产种毒为强毒,存在生物安全隐患。本研究是在rA-WT嵌合毒株L的SAP区域进行突变,消除或降低天然免疫抑制功能,致使其对猪和牛能够迅速诱导免疫应答,而不能发病,提高其作为疫苗毒株的生物安全性。 在实验室已有A型FMDV重组质粒（命名为prA-WT）基础上,利用口蹄疫病毒反向遗传操作技术,通过定点突变,构建口蹄疫病毒SAP区域突变的A型口蹄疫病毒重组质粒（命名为prA-mSAP）。将构建重组质粒转染BHK21细胞能致细胞病变（CPE）。连续传代后,经RT-PCR、间接免疫荧光等试验鉴定,结果证实,成功拯救了SAP突变的重组病毒（命名为rA-mSAP）。另外,比较测定了该重组毒与亲本毒（rA-WT）对BHK21细... 

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
    1.1 口蹄疫概述
    1.2 我国A型FMD流行及变异
    1.3 种毒筛选及疫苗研制
    1.4 FMD疫苗改善方法
    1.5 研究目的及意义
第二章 口蹄疫病毒A型SAP突变毒株构建、鉴定及生物学特性检测
    摘要
    2.1 试验材料
        2.1.1 质粒和细胞系
        2.1.2 载体与主要试剂
        2.1.3 试验所用溶液及其配制
        2.1.4 试验器材
    2.2 试验方法
        2.2.1 引物设计与合成
        2.2.2 L基因SAP区域突变
        2.2.3 含有SAP突变的重组质粒的构建
        2.2.4 重组病毒的拯救
        2.2.5 拯救病毒的鉴定
        2.2.6 生物学特性测定
    2.3 试验结果
        2.3.1 重组质粒PCD-OL的鉴定
        2.3.2 含有SAP突变质粒的鉴定
        2.3.3 重组病毒的拯救
        2.3.4 拯救病毒的鉴定
        2.3.5 拯救病毒的生物学特性
    2.4 讨论
第三章 RA-WT和RA-MSAP对猪致病性差异分析
    摘要
    3.1 试验材料
        3.1.1 毒株和试验动物
        3.1.2 试验试剂
    3.2 试验方法
        3.2.1 攻毒方案
        3.2.2 实时荧光定量PCR检测血毒症和鼻试子核酸含量
        3.2.3 血清抗体水平检测
    3.3 试验结果
        3.3.1 攻毒后体温测定以及临床症状记录结果
        3.3.2 血毒症和鼻试子核酸测定结果
        3.3.3 攻毒后抗体水平结果
    3.4 讨论
第四章 RA-WT和RA-MSAP免疫应答差异分析
    摘要
    4.1 试验材料
        4.1.1 毒株和佐剂
        4.1.2 抗体及试剂盒
    4.2 试验方法
        4.2.1 抗原量的确定以及灭活疫苗制备
        4.2.2 A型口蹄疫阴性猪的筛选
        4.2.3 免疫方案
        4.2.4 免疫后淋巴细胞亚群分化测定
        4.2.5 攻毒试验
    4.3 结果与分析
        4.3.1 RA-MSAP毒株与RA-WT毒株肌肉注射猪血清抗体水平检测结果
        4.3.2 RA-MSAP灭活疫苗和RA-WT灭活疫苗免疫猪的血清抗体水平检测结果
        4.3.3 RA-MSAP毒株与RA-WT毒株肌肉注射猪外周血淋巴细胞亚群分布
        4.3.4 RA-MSAP灭活疫苗和RA-WT灭活疫苗免疫猪外周血淋巴细胞亚群分布
        4.3.5 RA-MSAP毒株和RA-WT毒株肌肉注射后攻毒试验结果
        4.3.6 RA-MSAP灭活疫苗和RA-WT灭活疫苗免疫后攻毒试验结果
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]以AdMax载体系统构建和制备肾癌相关抗原G250基因重组腺病毒表达载体[J]. 齐桓.  南方医科大学学报. 2008(09)



本文编号：3703490