地方品种青脚麻鸡禽白血病的感染状态调查及其初步净化研究

发布时间：2022-11-07 20:28

　　禽白血病（avian leukosis, AL）在鸡群中引起的病理变化和临床表现多种多样，从免疫抑制、生长迟缓、产蛋下降，蛋品质下降等，直到明显的特征性的肿瘤发生以至于死亡，致死率较低。禽白血病病毒主要经种蛋垂直传播，水平传播的能力较弱，从祖代、父母代到商品代逐级放大极难净化彻底。本研究目的在于以ALV感染水平的调查为基础，引进血液样品直接PCR检测的方法作为禽白血病经典净化方法的有力补充。 1.感染状态的调查 为了探究禽白血病在山东某地青脚麻鸡核心群中感染状态，先后采取多种材料检测禽白血病病毒的存在，包括采用酶联免疫吸附试验检测泄殖腔棉拭子、卵白、细胞上清、血清中的P27抗原。调查过程中共涉及9个品系，各品系的泄殖腔棉拭子阳性率：A系为24.97%（227/909），B系为5.71%（14/245）C系为16.23%（69/425）,D系20.00%（24/120）,E系10.33%（137/1326），F系为46.67%（14/30）,H系为33.33%（8/24）,S系为0（0/12），X系为75%（9/12）。病毒的细胞培养，阳性率为14.8%（71/479），A系... 

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
符号及缩略词说明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 概述
    1.2 病原学
        1.2.1 病毒的分类地位
        1.2.2 病毒的形态和结构
        1.2.3 化学组成
            1.2.3.1 核心结构蛋白
            1.2.3.2 酶蛋白
            1.2.3.3 脂质
            1.2.3.4 病毒的核酸
        1.2.4 病毒的抵抗力
        1.2.5 核酸基因组的结构和功能
        1.2.6 病毒的复制
        1.2.7 致肿瘤机制和致病性
            1.2.7.1 致肿瘤机制
            1.2.7.2 致病性
    1.3 传播方式和流行特点
    1.4 临床症状和病理变化
        1.4.1 淋巴细胞性白血病（LL）
        1.4.2 成红细胞性白血病
        1.4.3 成髓细胞性白血病
        1.4.4 髓细胞样性白血病
        1.4.5 骨型白血病（OP）
    1.5 我国鸡白血病的流行现状
    1.6 公共卫生学和经济学意义
        1.6.1 公共卫生学意义
        1.6.2 经济学意义
    1.7 诊断和检测
        1.7.1 临床诊断
        1.7.2 常用实验室诊断方法
            1.7.2.1 病毒的分离和鉴定
            1.7.2.2 血清学检测
                1.7.2.2.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）
                1.7.2.2.2 补体结合试验（COFAL）
                1.7.2.2.3 间接免疫荧光反应（IFA）
            1.7.2.3 聚合酶链式反应（PCR）技术
            1.7.2.4 琼脂扩散试验
    1.8 禽白血病的防制
    1.9 研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 仪器设备
        2.1.2 成品试剂
        2.1.3 ELISA 检测试剂盒
        2.1.4 SPF 鸡胚
        2.1.5 DF1 细胞
        2.1.6 相关试剂的制备
        2.1.7 检测样品背景和来源
            2.1.7.1 感染状态调查的检测样品来源
            2.1.7.2 检测方法优化研究的样品来源
            2.1.7.3 初步净化的研究
    2.2 方法
        2.2.1 青脚麻鸡各个品系核心集群的 ALV 感染状态的抽样调查
            2.2.1.1 泄殖腔棉拭子、卵白和血清样品中 ALV P27 抗原的检测
            2.2.1.2 ALV 的细胞培养与检测
                2.2.1.2.1 鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
                2.2.1.2.2 青脚麻鸡细胞上清中 ALV P27 抗原的检测
        2.2.2 青脚麻鸡检测方法优化研究
            2.2.2.1 泄殖腔棉拭子和卵白抗原阳性率的比较
            2.2.2.2 禽白血病多种检测方法的比较研究
                2.2.2.2.1 血清抗原和泄殖腔棉拭子抗原的检测
                2.2.2.2.2 ALV-J 抗体的检测
                2.2.2.2.3 ALV 细胞培养与检测
                2.2.2.2.4 直接 PCR 方法检测
        2.2.3 核心鸡群建立过程中 ALV 的初步净化
            2.2.3.1 青脚麻鸡感染率极高核心群的净化及纯洁品系的建立
            2.2.3.2 青脚麻鸡感染率较轻的核心群的净化
                2.2.3.2.1 选取带有目的性状鸡只组成第 1 世代进行 ALV 的净化
                2.2.3.2.2 第二世代的追踪检测
                2.2.3.2.3 第三世代的追踪检测
3 结果与分析
    3.1 青脚麻鸡全群的 ALV 感染状态调查
        3.1.1 泄殖腔棉拭子、卵白和血清中带毒率检测结果
        3.1.2 ALV 的细胞分离鉴定
    3.2 青脚麻鸡 ALV 检测方法优化研究
        3.2.1 泄殖腔棉拭子和卵白中抗原检测一一对应的比较结果
        3.2.2 禽多种检测方法的比较研究
            3.2.2.1 血液和泄殖腔棉拭子样品 P27 抗原的检测结果
            3.2.2.2 血清中 ALV-J 抗体的检测结果
            3.2.2.3 血液样品的 ALV 细胞培养后检测结果
            3.2.2.4 血液样品 ALV-J 的直接 PCR 方法的检测结果
            3.2.2.5 不同检测方法对疑似 ALV 阳性样品的验证结果
    3.3 ALV 感染核心群初步净化的研究
        3.3.1 青脚麻鸡新建核心群的净化成果
            3.3.1.1 第 1 世代全部个体的 ALV 分离鉴定结果
            3.3.1.2 第 2 世代方式对多种 ALV 追踪检测
        3.3.2 青脚麻鸡感染率较轻的核心群的净化
            3.3.2.1 第 1 世代进行 ALV 的净化
            3.3.2.2 第二世代的追踪检测
            3.3.2.3 第三世代的追踪检测
4 讨论
5 结论
创新点
参考文献
致谢
个人简介
攻读硕士期间论文发表情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同地区海兰褐蛋鸡中J亚群-禽白血病病毒株gp85基因的分子演化分析[J]. 代阳,杨其峰,王波,刘绍琼,王秀臻,柴家前,崔治中,孙淑红.  畜牧兽医学报. 2010(05)
[2]鸡白血病检测技术研究[J]. 秦爱建.  中国家禽. 2010(07)
[3]J亚群禽白血病病毒分子流行病学研究进展[J]. 柴家前,王贵强,孙淑红,郭慧君,崔治中.  山东畜牧兽医. 2009(01)
[4]蛋鸡J亚群白血病病毒的分离鉴定及序列分析[J]. 王辉,崔治中.  病毒学报. 2008(05)
[5]我国1999-2003年间ALV-J野毒株gp85基因变异趋势[J]. 王增福,崔治中,张志,吴永平.  中国病毒学. 2005(04)
[6]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中.  微生物学报. 2005(04)
[7]用ALV-Jgp85单克隆抗体证明蛋鸡存在J亚群禽白血病[J]. 徐镔蕊,董卫星,余春明,冯小宇,李宁,Lucy F.Lee,Maoxiang Li.  畜牧兽医学报. 2005(03)
[8]从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒[J]. 张志,崔治中,姜世金.  中国兽医学报. 2004(01)
[9]我国肉用型鸡群中J亚群白血病流行现状的调查[J]. 崔治中,张志,杜岩.  中国预防兽医学报. 2002(04)
[10]应用ELISA方法调查鸡骨髓细胞瘤病[J]. 成子强,赵心力,郝永清,郭金贵,高娃,顾玉芳,杨玉莹,张二芹,赵振华.  中国家禽. 2002(06)

博士论文
[1]禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D]. 秦爱建.扬州大学 1999



本文编号：3704348