猪源microRNA-1307抑制口蹄疫病毒复制的分子机理研究

发布时间：2022-11-11 20:52

　　口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）感染所引起的一种急性、热性、高度接触传染性疫病,主要感染猪、牛、羊等偶蹄动物。该病传播途径多、传播速度快,曾在世界范围内造成巨大经济损失,被世界动物卫生组织列为法定报告的动物疫病。目前对于该病的防控主要以疫苗免疫预防为主,而且传统灭活疫苗仍占据主导地位。然而,传统疫苗在许多方面仍亟待改进,如存在安全风险、疫苗研发周期较长、免疫反应滞后、免疫保护时间较短等,因此研制新型疫苗对于提高免疫效果和快速有效地防控口蹄疫具有重要意义,而深入研究病毒感染机制和宿主免疫机理将为疫苗研发提供理论基础。研究表明microRNAs（miRNAs）在病毒与宿主细胞相互作用的过程中发挥重要的调节作用,因此,通过操控miRNAs的作用抑制病毒复制是防控病毒病的新型策略。然而,到目前为止,宿主miRNAs在口蹄疫病毒感染过程中的作用及其机理研究很少。基于上述现状,我们以近些年我国境内的流行毒株FMDV/O/BY/2010和其天然宿主细胞系PK-15（猪肾细胞系）为主要研究... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 前言
    1.2 口蹄疫
        1.2.1 口蹄疫的流行现状
        1.2.2 口蹄疫病毒的结构特点及其致病性
        1.2.3 宿主抗口蹄疫病毒感染的免疫机理研究
        1.2.4 口蹄疫的防控现状
    1.3 miRNAs和RNAi
        1.3.1 miRNAs的特点及研究进展
        1.3.2 RNAi在常见猪病中的研究进展
    1.4 总结与展望
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 质粒、菌株、毒株和细胞系
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 常用试剂配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 口蹄疫病毒的繁殖
        2.2.3 口蹄疫病毒TCID_(50)的测定
        2.2.4 病毒感染实验
        2.2.5 芯片杂交及数据分析
        2.2.6 细胞转染
        2.2.7 miRNAs的提取及定量
        2.2.8 miR-1307过量表达细胞株的构建
        2.2.9 RT-qPCR
        2.2.10 Western blot
        2.2.11 双荧光素酶报告实验
        2.2.12 乳鼠攻毒实验
第三章 实验结果与分析
    3.1 口蹄疫病毒感染差异调控miRNAs的鉴定
    3.2 口蹄疫病毒感染诱导miR-1307的表达
    3.3 转染miR-1307的模拟物显著抑制口蹄疫病毒的复制
    3.4 过量表达miR-1307抑制口蹄疫病毒的复制
    3.5 过量表达miR-1307特异性地降低VP1和VP3的蛋白表达水平
    3.6 miR-1307特异性地降低VP1和VP3的RNA稳定性
    3.7 miR-1307可能间接调控VP1和VP3的RNA稳定性
    3.8 miR-1307能够显著延缓口蹄疫病毒对乳鼠的致死效应
第四章 讨论
    4.1 猪源miR-1307抑制口蹄疫病毒的复制
    4.2 miR-1307降低口蹄疫病毒基因组VP1和VP3编码序列的RNA稳定性
    4.3 miR-1307在口蹄疫防控方面有临床应用前景
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3705727