日粮纤维/淀粉对生长肉兔生长、免疫、肠道菌群的影响及肠道蛋白质组学初探
发布时间：2022-11-12 09:53
家兔消化道疾病是制约家兔养殖业发展的一个重要因素，由于抗生素的大量使用会造成细菌耐药性和肉制品安全等问题，而通过日粮调控来预防消化道腹泻被普遍认可。根据家兔的生理特点，日粮纤维在家兔饲料组分中占重要地位，饲粮淀粉是主要能量来源，保证家兔健康而又有充分的经济回报是广大养殖户所追求的。因此，日粮中合理的纤维/淀粉在家兔生产中具有重要意义。 本研究选用平均体重相近的断奶新西兰肉兔200只，根据日粮NDF/淀粉为2.3，1.9，1.4，1.0，随机分成4组，每组50只，正式期40天（42-82日龄）。围绕试兔生产指标、盲肠发酵、肠道黏膜发育、特异性及非特异性免疫、肠道微生物多样性及丰度等方面评价了日粮纤维/淀粉对试兔机体内环境的影响，并利用蛋白质组学研究初步探讨了健康与腹泻组试兔肠道蛋白表达差异，综上所述得出以下系列结果： 1.调控NDF/淀粉对试兔生产、盲肠发酵、肠道黏膜发育的影响 各处理组试兔82日龄时，每组选10只屠宰，测定各项相关指标。结果表明：饲粮NDF/淀粉对试兔平均日增重、料重比影响显著（P＜0.05），随着NDF/淀粉的降低，平均日增重（ADG）先升高后...
【文章页数】：156 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 日粮纤维和淀粉的定义及测定方法
1.1.1 日粮纤维的定义
1.1.2 日粮纤维分类
1.1.3 日粮纤维的测定方法
1.1.4 日粮淀粉的定义
1.1.5 淀粉的测定
1.2 家兔日粮纤维的研究进展
1.2.1 家兔对纤维的消化机制
1.2.2 家兔对纤维的消化能力
1.2.3 纤维对家兔的营养和健康状况的影响
1.3 家兔日粮淀粉的研究进展
1.3.1 家兔对日粮淀粉的消化机制
1.3.2 淀粉对家兔健康的影响
1.4 日粮纤维和淀粉水平对生长肉兔生产性能的影响
1.5 日粮纤维和淀粉水平对肠道组织形态学的影响
1.6 家兔营养水平对免疫指标的影响
1.6.1 家兔肠道相关淋巴组织
1.6.2 家兔肠道淋巴细胞
1.6.3 日粮对免疫系统的影响
1.7 营养与肠道菌群
1.7.1 家兔肠道菌群的多样性
1.7.2 肠道微生物群检测方法研究进展
1.7.3 肠道微生物时间动态监测研究进展
1.7.4 肠道菌群对肠道消化和饲料转化率的作用研究进展
1.7.5 肠道微生物的定植和物种的生态交替研究进展
1.7.6 营养因素对肠道菌群的影响
1.7.7 微生物对肠道黏膜成熟的影响研究进展
1.7.8 对初次免疫应答抗体的多样性的影响研究进展
1.8 蛋白质组学
1.8.1 蛋白质组学的概念
1.8.2 二维电泳技术的基本原理
1.8.3 营养蛋白质组研究
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验动物
2.1.2 试验日粮
2.1.3 试验设计
2.1.4 饲养管理
2.1.5 主要试剂
2.1.6 主要仪器
2.1.7 试剂配制
2.2 方法
2.2.1 生产性能指标与腹泻指数
2.2.2 消化道发育指标
2.2.3 免疫组化方法的建立
2.2.4 利用流式细胞技术检测血液中CD4~+和CD8~+免疫细胞方法的建立
2.2.5 用酶联免疫吸附（ELISA）检测SIgA效价的方法建立
2.2.6 用ELISA方法检测血清抗体的效价
2.2.7 引物合成
2.2.8 盲肠内容物DNA提取
2.2.9 提取盲肠内容物总DNA的完整性及纯度检测
2.2.10 高通量测序方法
2.2.11 DGGE方法的建立
2.2.12 腹泻与健康试兔剖检病理变化
2.2.13 腹泻与健康试兔的蚓突黏膜扫描电镜观察
2.2.14 腹泻与健康试兔的盲肠组织蛋白提取、纯化、定量
2.2.15 二维电泳操作步骤
2.2.16 蛋白质谱检测
2.2.17 SDS-PAGE操作步骤
2.2.18 Werstern-blot试验步骤
2.3 数据处理与统计
2.3.1 生产指标、消化道发育、盲肠内环境指标统计分析
2.3.2 免疫应答数据处理与统计
2.3.3 肠道菌群组成数据统计分析
2.3.4 二维电泳凝胶图谱分析
2.3.5 蛋白质谱分析
3 结果与分析
3.1 不同NDF/淀粉的日粮对生产性能的影响
3.2 不同NDF/淀粉的日粮对试兔腹泻率的影响
3.3 不同NDF/淀粉的日粮对试兔胃肠道发育指标的影响
3.4 不同NDF/淀粉的日粮对试兔盲肠内环境的影响
3.5 不同NDF/淀粉的日粮对试兔十二指肠绒毛高度和隐窝深度的影响
3.6 蚓突与圆小囊组织中 M 细胞数量及形态的变化规律的研究
3.6.1 M细胞的数量变化
3.6.2 M细胞的形态学变化
3.7 试兔血清中IgG、CD4~+/CD8~+和肠道SIgA水平变化规律的研究
3.8 试兔盲肠内容物DNA样品的提取
3.9 细菌16SrRNA基因特异性片段PCR扩增
3.10 高通量测序
3.10.1 各DNA文库间试兔盲肠菌群组成
3.10.2 细菌多样性分析
3.11 盲肠内容物细菌PCR-DGGE指纹及其结果
3.12 健康与腹泻试兔蛋白质组学分析
3.12.1 试兔与健康兔的肠道组织学变化
3.12.2 扫描电镜结果
3.12.3 二维电泳图谱分析结果
3.12.4 image master7.0软件分析结果
3.12.5 蛋白质谱分析
3.12.6 免疫蛋白印迹实验结果
4 讨论
4.1 饲粮中不同NDF/淀粉对生长肉兔生产性能及腹泻率的影响
4.2 饲粮中不同NDF/淀粉对生长肉兔胃肠道发育的影响
4.3 饲粮中不同NDF/淀粉对试兔盲肠内环境的影响
4.4 饲粮中不同NDF/淀粉对试兔十二指肠绒毛高度和隐窝深度的影响
4.5 日粮纤维/淀粉对黏膜免疫的影响
4.6 日粮纤维/淀粉对体液免疫的影响
4.7 不同纤维/淀粉日粮调控下，在门的分类水平上试兔盲肠微生物的变化
4.8 不同日粮调控下在种属水平上菌群的变化
4.9 健康试兔与腹泻兔蛋白表达差异
4.9.1 吸收、消化、转运
4.9.2 细胞结构与肌肉运动
4.9.3 炎症反应
4.9.4 参与葡萄糖与能量代谢
4.9.5 矿物质和维生素代谢
4.9.6 应激反应
4.9.7 氧化还原
5 结论
6 参考文献
7 附录
8 致谢
9 攻读博士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]高通量测序技术及其应用[J]. 王兴春,杨致荣,王敏,李玮,李生才. 中国生物工程杂志. 2012(01)
[2]白蛋白的临床应用及在营养治疗中的意义[J]. 罗茜,曹伟新. 中国临床营养杂志. 2007(05)
[3]饲粮中中性洗涤纤维的研究进展[J]. 吴秋珏,徐廷生. 饲料工业. 2006(07)
[4]2～3月龄肉兔日粮消化能水平对消化代谢和产肉性能影响的研究[J]. 祝素珍,李福昌. 动物营养学报. 2004(04)
[5]肌酸激酶结构与功能研究进展[J]. 周秀菊,刘党生,蒋宇扬. 沈阳药科大学学报. 2002(05)
[6]家兔大肠杆菌所致腹泻兔机体理化参数变化及病理特性研究[J]. 鲍国连,佟承刚,韦强,陶争荣,季权安. 中国养兔. 2001(01)
[7]家兔对不同品质粗纤维利用能力的研究[J]. 秦应和,王俐,柯尊伟,杜玉川. 饲料研究. 2000(02)
[8]家兔腹泻病主要病原及防治对策(上)[J]. 董亚芳. 中国养兔杂志. 1998(02)
[9]两种不同来源颗粒料对幼兔生长影响的比较[J]. 高静华. 上海畜牧兽医通讯. 1995(01)
[10]日粮粗纤维水平对兔饲料转化率的影响[J]. 金岭梅. 甘肃畜牧兽医. 1994(06)
本文编号：3706152
【文章页数】：156 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 日粮纤维和淀粉的定义及测定方法
1.1.1 日粮纤维的定义
1.1.2 日粮纤维分类
1.1.3 日粮纤维的测定方法
1.1.4 日粮淀粉的定义
1.1.5 淀粉的测定
1.2 家兔日粮纤维的研究进展
1.2.1 家兔对纤维的消化机制
1.2.2 家兔对纤维的消化能力
1.2.3 纤维对家兔的营养和健康状况的影响
1.3 家兔日粮淀粉的研究进展
1.3.1 家兔对日粮淀粉的消化机制
1.3.2 淀粉对家兔健康的影响
1.4 日粮纤维和淀粉水平对生长肉兔生产性能的影响
1.5 日粮纤维和淀粉水平对肠道组织形态学的影响
1.6 家兔营养水平对免疫指标的影响
1.6.1 家兔肠道相关淋巴组织
1.6.2 家兔肠道淋巴细胞
1.6.3 日粮对免疫系统的影响
1.7 营养与肠道菌群
1.7.1 家兔肠道菌群的多样性
1.7.2 肠道微生物群检测方法研究进展
1.7.3 肠道微生物时间动态监测研究进展
1.7.4 肠道菌群对肠道消化和饲料转化率的作用研究进展
1.7.5 肠道微生物的定植和物种的生态交替研究进展
1.7.6 营养因素对肠道菌群的影响
1.7.7 微生物对肠道黏膜成熟的影响研究进展
1.7.8 对初次免疫应答抗体的多样性的影响研究进展
1.8 蛋白质组学
1.8.1 蛋白质组学的概念
1.8.2 二维电泳技术的基本原理
1.8.3 营养蛋白质组研究
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 试验动物
2.1.2 试验日粮
2.1.3 试验设计
2.1.4 饲养管理
2.1.5 主要试剂
2.1.6 主要仪器
2.1.7 试剂配制
2.2 方法
2.2.1 生产性能指标与腹泻指数
2.2.2 消化道发育指标
2.2.3 免疫组化方法的建立
2.2.4 利用流式细胞技术检测血液中CD4~+和CD8~+免疫细胞方法的建立
2.2.5 用酶联免疫吸附（ELISA）检测SIgA效价的方法建立
2.2.6 用ELISA方法检测血清抗体的效价
2.2.7 引物合成
2.2.8 盲肠内容物DNA提取
2.2.9 提取盲肠内容物总DNA的完整性及纯度检测
2.2.10 高通量测序方法
2.2.11 DGGE方法的建立
2.2.12 腹泻与健康试兔剖检病理变化
2.2.13 腹泻与健康试兔的蚓突黏膜扫描电镜观察
2.2.14 腹泻与健康试兔的盲肠组织蛋白提取、纯化、定量
2.2.15 二维电泳操作步骤
2.2.16 蛋白质谱检测
2.2.17 SDS-PAGE操作步骤
2.2.18 Werstern-blot试验步骤
2.3 数据处理与统计
2.3.1 生产指标、消化道发育、盲肠内环境指标统计分析
2.3.2 免疫应答数据处理与统计
2.3.3 肠道菌群组成数据统计分析
2.3.4 二维电泳凝胶图谱分析
2.3.5 蛋白质谱分析
3 结果与分析
3.1 不同NDF/淀粉的日粮对生产性能的影响
3.2 不同NDF/淀粉的日粮对试兔腹泻率的影响
3.3 不同NDF/淀粉的日粮对试兔胃肠道发育指标的影响
3.4 不同NDF/淀粉的日粮对试兔盲肠内环境的影响
3.5 不同NDF/淀粉的日粮对试兔十二指肠绒毛高度和隐窝深度的影响
3.6 蚓突与圆小囊组织中 M 细胞数量及形态的变化规律的研究
3.6.1 M细胞的数量变化
3.6.2 M细胞的形态学变化
3.7 试兔血清中IgG、CD4~+/CD8~+和肠道SIgA水平变化规律的研究
3.8 试兔盲肠内容物DNA样品的提取
3.9 细菌16SrRNA基因特异性片段PCR扩增
3.10 高通量测序
3.10.1 各DNA文库间试兔盲肠菌群组成
3.10.2 细菌多样性分析
3.11 盲肠内容物细菌PCR-DGGE指纹及其结果
3.12 健康与腹泻试兔蛋白质组学分析
3.12.1 试兔与健康兔的肠道组织学变化
3.12.2 扫描电镜结果
3.12.3 二维电泳图谱分析结果
3.12.4 image master7.0软件分析结果
3.12.5 蛋白质谱分析
3.12.6 免疫蛋白印迹实验结果
4 讨论
4.1 饲粮中不同NDF/淀粉对生长肉兔生产性能及腹泻率的影响
4.2 饲粮中不同NDF/淀粉对生长肉兔胃肠道发育的影响
4.3 饲粮中不同NDF/淀粉对试兔盲肠内环境的影响
4.4 饲粮中不同NDF/淀粉对试兔十二指肠绒毛高度和隐窝深度的影响
4.5 日粮纤维/淀粉对黏膜免疫的影响
4.6 日粮纤维/淀粉对体液免疫的影响
4.7 不同纤维/淀粉日粮调控下，在门的分类水平上试兔盲肠微生物的变化
4.8 不同日粮调控下在种属水平上菌群的变化
4.9 健康试兔与腹泻兔蛋白表达差异
4.9.1 吸收、消化、转运
4.9.2 细胞结构与肌肉运动
4.9.3 炎症反应
4.9.4 参与葡萄糖与能量代谢
4.9.5 矿物质和维生素代谢
4.9.6 应激反应
4.9.7 氧化还原
5 结论
6 参考文献
7 附录
8 致谢
9 攻读博士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]高通量测序技术及其应用[J]. 王兴春,杨致荣,王敏,李玮,李生才. 中国生物工程杂志. 2012(01)
[2]白蛋白的临床应用及在营养治疗中的意义[J]. 罗茜,曹伟新. 中国临床营养杂志. 2007(05)
[3]饲粮中中性洗涤纤维的研究进展[J]. 吴秋珏,徐廷生. 饲料工业. 2006(07)
[4]2～3月龄肉兔日粮消化能水平对消化代谢和产肉性能影响的研究[J]. 祝素珍,李福昌. 动物营养学报. 2004(04)
[5]肌酸激酶结构与功能研究进展[J]. 周秀菊,刘党生,蒋宇扬. 沈阳药科大学学报. 2002(05)
[6]家兔大肠杆菌所致腹泻兔机体理化参数变化及病理特性研究[J]. 鲍国连,佟承刚,韦强,陶争荣,季权安. 中国养兔. 2001(01)
[7]家兔对不同品质粗纤维利用能力的研究[J]. 秦应和,王俐,柯尊伟,杜玉川. 饲料研究. 2000(02)
[8]家兔腹泻病主要病原及防治对策(上)[J]. 董亚芳. 中国养兔杂志. 1998(02)
[9]两种不同来源颗粒料对幼兔生长影响的比较[J]. 高静华. 上海畜牧兽医通讯. 1995(01)
[10]日粮粗纤维水平对兔饲料转化率的影响[J]. 金岭梅. 甘肃畜牧兽医. 1994(06)
本文编号：3706152
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