甲基-β-环化糊精对猪体外受精的影响研究

发布时间：2022-11-12 15:43

　　近些年来,随着体外受精（IVF）技术的出现,在体外获得胚胎的技术取得了实质性的发展。体外受精技术不仅应用于畜牧生产,同时,也成为研究其他胚胎生物技术,如克隆、转基因、胚胎干细胞分离培养和性别控制等的重要辅助手段。然而,在猪IVF的过程中,多精受精现象是一个始终无法解决的问题。所以,尽量地降低多精受精的比率,对于获得更多高质量的IVF胚胎来说是相当重要的。而其中,培养液的优化是降低多精受精的比率的重要组成部分。 为了优化猪体外受精技术体系,本试验探索了在猪IVF培养体系中,在几个关键的时间点加入不同浓度的甲基-p-环化糊精（MBCD）,经过体外受精以及胚胎培养后,来评估其胚胎的发育能力以及体外受精的效率,从而探索甲基-p-环化糊精（MBCD）对猪体外受精的效率以及度随后的胚胎发育的影响。并通过CTC染色的方法来评估精子在含甲基-p-环化糊精（MBCD）的IVF体系中的获能状态。 在体外受精前48h、体外受精0h、4h和6h向受精液（modified Tris-buffered medium, mTBM）中添加不同浓度（0μmol/mL、0.5μmol/mL、1μmol/L... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 体外受精
    1.2 多精受精
        1.2.1 体内阻止多精受精的方法
        1.2.2 体外影响多精受精的因素
        1.2.3 减少多精受精采取的措施
    1.3 精子获能
        1.3.1 概述
        1.3.2 精子获能的分析方法
        1.3.3 精子获能的机制
    1.4 环化糊精
    1.5 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 猪卵巢
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验主要器材
        2.1.4 主要试剂的配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 猪精子的准备
        2.2.2 猪体外受精程序
        2.2.3 胚胎细胞核染色(Hoechst 33342染色法)
        2.2.4 金霉素荧光检测精子(Hoechst 33258-CTC联合染色法)
        2.2.5 统计分析
3 结果与分析
    3.1 MBCD对猪体外受精胚胎发育的影响
        3.1.1 IVT前48h向受精液中添加不同浓度MBCD对胚胎发育的影响
        3.1.2 IVF 0h向受精液中添加不同浓度MBCD对胚胎发育的影响
        3.1.3 IVF 4h后向受精液中添加不同浓度MBCD对胚胎发育的影响
        3.1.4 IVF 6h后向PZM-3中添加不同浓度MBCD对胚胎发育的影响
    3.2 MBCD对猪体外受精状态的影响
        3.2.1 IVF前48h向受精液中添加不同浓度MBCD对猪受精状态的影响
        3.2.2 IVF 0h向受精液中添加不同浓度MBCD对猪受精状态的影响
        3.2.3 IVF 4h向受精液中添加不同浓度MBCD对猪受精状态的影响
    3.3 MBCD对猪体外受精过程中精子获能状态的影响
        3.3.1 向受精液中添加0μmol/ml的MBCD对猪精子获能状态的影响
        3.3.2 向受精液中添加1μmol/ml的MBCD对猪精子获能状态的影响
        3.3.3 向受精液中添加5μmol/ml的MBCD对猪精子获能状态的影响
        3.3.4 向受精液中添加20μmol/ml的MBCD对猪精子获能状态的影响
4 讨论
    4.1 MBCD在受精液中的毒性问题
    4.2 MBCD在受精液中的降解问题
    4.3 MBCD对于猪体外受精胚胎发育的影响
    4.4 MBCD对于猪体外受精效率的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]酪氨酸磷酸化在精子获能中的作用[J]. 樊国彪,李洲平,曾海涛.  生命科学研究. 2008(04)
[2]钙调蛋白抑制剂对小鼠精子获能影响的研究[J]. 李坤,薛亚梅,吕杰强.  中华男科学杂志. 2008(03)
[3]精子获能过程中蛋白酪氨酸磷酸化的研究进展[J]. 孔丽娟,王根林.  畜牧与兽医. 2007(08)
[4]体外受精过程中多精受精发生机制[J]. 孙新明,代远玲,孙弋.  井冈山学院学报(自然科学版). 2007(03)
[5]猪体外受精中多精子受精[J]. 白修云,梁素丽,李向臣,关伟军.  上海畜牧兽医通讯. 2007(02)
[6]β-环糊精胆固醇包合物对牛性控精子品质的影响[J]. 陈军,张治国,帅志强,杨洁,王亮,李艳君,张云梅,张居农.  中国奶牛. 2007(02)
[7]外源性胆固醇对精子膜的保护作用[J]. 陈军,张居农.  黑龙江动物繁殖. 2005(04)
[8]BSA在精子获能中的作用及其替代物研究进展[J]. 刘丽清,周佳勃,刘娣.  动物医学进展. 2005(06)
[9]影响哺乳动物精子体外获能的因素[J]. 魏红芳,郭建来.  畜牧与饲料科学. 2004(06)
[10]环糊精及其衍生物功能性能研究进展[J]. 万军民,胡智文,陈文兴,陈海相.  化学试剂. 2004(01)



本文编号：3706639