K亚群禽白血病病毒细胞受体的鉴定

发布时间：2022-11-12 15:26

　　禽白血病病毒（ALV）进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV（ALV-K）是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实验室前期拯救的重组病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP进行病毒受体的交叉干扰试验,结果显示A亚群ALV（ALV-A）gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-Kgp85蛋白也能够抑制ALV-A的感染,存在受体交叉干扰现象,因而推测二者可能共用细胞受体。已有研究表明Tva是ALV-A的细胞受体,本研究利用Co-IP和Pull-down试验检测了ALV-Kgp85与Tva的互作,结果显示ALV-Kgp85蛋白能与可溶性的Tva（sTva）相互作用。进一步的流式细胞术结果显示ALV-Kgp85能够高效结合Tva,结合率在90%以上。为进一步验证Tva是否能介导ALV-K进入细胞,利用ALV的非易感细胞HEK293T进行了Tva受体重建试验,结果显示RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的293T细胞并复制产生较强的绿色... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒、细胞株及质粒
    1.2 主要试剂
    1.3 ALV-K gp85蛋白真核表达质粒的构建与鉴定
    1.4 Tva蛋白可溶性及跨膜表达的检测
    1.5 不同亚群ALV gp85-Fc蛋白的真核表达及gp85-Fc和s Tva蛋白纯化效果的检测
    1.6 ALV-A和ALV-K的受体交叉干扰试验
    1.7 ALV-K gp85与sTva蛋白相互作用的Pull-down检测
    1.8 ALV-K gp85与sTva蛋白相互作用的Co-IP检测
    1.9 ALV-K gp85蛋白与跨膜表达的Tva蛋白结合的检测
    1.1 0 Tva介导RCAS-K-GFP重组病毒进入非易感细胞中的检测
2 结果
    2.1 ALV-K gp85真核表达质粒的构建与鉴定
    2.2 不同亚群ALV gp85、Tva蛋白可溶性及跨膜表达的检测结果
    2.3 ALV-A、ALV-K重组病毒的受体交叉干扰试验结果
    2.4 ALV-K gp85与sTva相互作用的Pull-down和Co-IP检测结果
    2.5 ALV-K gp85与跨膜表达的Tva结合的检测结果
    2.6 Tva介导RCAS-K-GFP重组病毒进入非易感细胞的检测结果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的真核表达纯化及其生物学活性分析[J]. 张瑶,任超琪,于蒙蒙,高祥,管晓璐,祁小乐,王永强,刘长军,王笑梅,高玉龙.  中国预防兽医学报. 2017(10)
[2]我国地方品种鸡分离到的一个禽白血病病毒新亚群的鉴定[J]. 王鑫,赵鹏,崔治中.  病毒学报. 2012(06)



本文编号：3706617