CpG-ODN/Poly（I:C）核酸缓释佐剂对REV亚单位/DNA疫苗反应的免疫调节作用

发布时间：2022-11-12 14:36

　　禽网状内皮组织增生症病毒是一种可引起感染鸡只产生免疫抑制和网状细胞瘤的RNA病毒,感染REV后的鸡只由于疫苗免疫后抗体反应受到显著抑制从而易于感染其它疾病,这给养鸡业可能带来不可估量的损失。近年来,REV感染率有明显上升的趋势,利用亚单位疫苗或DNA疫苗防制该病被认为是最具潜力的措施,但提高亚单位疫苗和DNA疫苗免疫保护反应也是亟待解决的科学技术问题,本课题利用CpG ODN/Poly（I:C）制备成新型核酸缓释佐剂,分别与REV亚单位疫苗抗原/DNA疫苗抗原联合免疫接种雏鸡,探讨了它们对两种疫苗免疫保护反应的调节作用。本研究首先从REV病毒感染细胞中扩增获得囊膜蛋白gp90基因,分别构建了重组原核表达载体pET-32a-gp90和DNA真核表达载体PVAX1-gp90。构建的pET-32a-gp90表达载体转化至Rosseta（DE3）菌体内,经IPTG诱导获得高表达的重组蛋白产物,利用SDS-PAGE和REV单抗介导的Western blot进行目的蛋白的鉴定分析,经镍柱纯化和蛋白定量后用作接种抗原。构建的DNA真核表达载体PVAX1-gp90用脂质体Lipo3000瞬时转染至鸡胚... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 禽网状内皮组织增生症病毒
        1.1.1 病原学
        1.1.2 流行病学
        1.1.3 临床症状及病理变化
        1.1.4 诊断方法
        1.1.5 防控现状
    1.2 畜禽基因工程疫苗的研究进展
        1.2.1 基因工程亚单位疫苗
        1.2.2 DNA疫苗
    1.3 疫苗免疫佐剂概述
        1.3.1 CpG ODN佐剂
        1.3.2 Poly(I: C)佐剂
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 病毒与细胞
        2.1.2 宿主菌、载体与佐剂
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 实验动物
        2.1.5 主要仪器
        2.1.6 试验地点
    2.2 两种免疫原的制备
        2.2.1 REV亚单位疫苗免疫抗原的制备
        2.2.2 REV DNA疫苗免疫抗原的制备
    2.3 动物免疫接种试验
        2.3.1 CPG/Poly(I:C)佐剂联合REV亚单位疫苗免疫雏鸡诱导免疫保护性研究
        2.3.2 CPG/Poly(I:C)佐剂联合REV DNA疫苗免疫雏鸡诱导免疫保护性研究
3 结果与分析
    3.1 CpG-ODN/Poly(I:C)对REV亚单位疫苗的免疫增强效果研究
        3.1.1 REV-gp90原核表达载体的构建与鉴定
        3.1.2 重组gp90蛋白表达纯化及western blot分析
        3.1.3 CpG-ODN/Poly(I:C)佐剂联合REV亚单位疫苗免疫雏鸡诱导保护性研究
    3.2 CpG/Poly(I:C)对DNA疫苗的免疫增强效果研究
        3.2.1 REV-gp90真核表达载体的构建与鉴定
        3.2.2 重组真核表达质粒PVAX1-gp90在细胞中的表达鉴定
        3.2.3 CpG/Poly(I:C)佐剂联合DNA疫苗免疫雏鸡诱导免疫保护性研究
4 讨论
5 结论
6 创新点
参考文献
致谢
攻读学位期间取得学术成果（论文和专利）


【参考文献】：
期刊论文
[1]华东北部地区禽肿瘤性传染病流行病学调查[J]. 张康,龚振华,刘坤,王丽萍,刘国庆,李蕾,张丽娟,侯广宇,张秀娟,单虎.  中国动物检疫. 2013(08)
[2]禽Toll样受体研究进展[J]. 丁娜,孙英杰,丁铲.  中国动物传染病学报. 2011(06)
[3]雏鸡不同组织TLR3、TLR7和TLR21 mRNA转录水平研究[J]. 周作勇,聂奎,胡世君,周荣琼.  中国兽医学报. 2011(07)
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[9]口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价合成肽疫苗对山羊免疫持续期的研究[J]. 李天增,朱刚,刘宏,王延,黄炯,乌斯满江,徐亚萍,王莉君.  兽医导刊. 2010(06)
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硕士论文
[1]2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立克活疫苗中污染的检测[D]. 曾婷婷.广西大学 2012
[2]鸡Toll样受体3的克隆及其参与IBDV感染的初步研究[D]. 甘珊珊.广西民族大学 2011



本文编号：3706548