6-溴-靛玉红-3’-肟对LPS诱导的小鼠乳腺炎及细胞凋亡的作用及机制研究
发布时间：2022-11-12 13:40
奶牛乳腺炎是制约世界奶牛养殖业发展的重要疾病。该病主要由病原微生物（细菌、真菌、支原体等）黏附于乳腺组织引起,其临床治疗以抗生素疗法为主,因此这易引起的细菌耐药性增加,且抗生素残留严重威胁人类健康。中药毒性低、副作用小,用于临床治疗乳腺炎前景良好。靛玉红是青黛、大青叶等中药的主要有效成分,具有抗炎、抗肿瘤之功效,但因其水溶性差、生物利用度低、口服不易吸收等特性,临床应用受限。6-溴-靛玉红-3’-肟（BIO,又称6BIO）是靛玉红的衍生物之一,抗癌功效与靛玉红相似,水溶性优于靛玉红。研究表明BIO对乳腺癌、膀胱癌的治疗有重要作用,但其对于乳腺炎的治疗效果尚未见报道。为研究BIO在治疗乳腺炎方面的作用,本研究构建了体外和小鼠体内乳腺炎模型,通过研究经BIO干预后,促炎因子、抑炎因子水平变化,评估BIO对乳腺炎的调节作用。通过进一步检测BIO对TLR4-NF-κB和TLR4-MAPKs通路的调控作用,确定BIO对乳腺炎的调控机制。检测细胞凋亡率、凋亡相关信号通路变化,确定BIO在炎症过程中抑制乳腺上皮细胞凋亡的机制,为BIO用于临床防控奶牛乳腺炎提供理论依据。主要研究结果如下:1.BIO试...
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
1 前言
1.1 研究问题由来
1.2 文献综述
1.2.1 奶牛乳腺炎病原微生物及主要防治方法
1.2.2 奶牛乳腺炎与天然免疫
1.2.3 中药防治奶牛乳腺炎作用机制研究进展
1.2.4 靛玉红及其衍生物的作用研究
2 研究目的与意义
3 材料与方法
3.1 试验材料
3.1.1 试验动物
3.1.2 试剂及耗材
3.1.3 试验仪器
3.1.4 工作液配置
3.2 试验方法
3.2.1 MMECs提取
3.2.2 BIO对MMECs活性影响
3.2.3 BIO抑炎浓度确定
3.2.4 体外模型构建
3.2.5 体内模型的构建
3.2.6 qRT-PCR试验
3.2.7 ELISA检测相关炎性因子
3.2.8 MMECs总蛋白的提取
3.2.9 BCA测定蛋白浓度
3.2.10 相关蛋白westernblot检测
3.2.11 小鼠乳腺炎模型的评价
3.2.12 病理切片制作及观察
3.2.13 组织匀浆上清的制备
3.2.14 试验小鼠血清的处理
3.2.15 试验小鼠MPO检测
3.2.16 流式细胞术
4 结果与分析
4.1 筛选BIO工作浓度
4.1.1 不同浓度BIO对细胞活性影响
4.1.2 BIO最佳抑炎浓度的确定
4.2 BIO抑制LPS诱致的MMECs炎性反应
4.2.1 BIO对COX-2表达的影响
4.2.2 BIO对促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达的影响
4.2.3 BIO对IL-10表达的影响
4.3 BIO抑制LPS对小鼠乳腺的损伤
4.3.1 乳腺大体组织学观察
4.3.2 乳腺病理组织学观察
4.3.3 乳腺损伤评分
4.3.4 乳腺组织中促炎因子的表达
4.3.5 MPO活性检测
4.4 BIO抑制TLR4-NF-κB及TLR4-MAPKs活性
4.4.1 BIO对TLR4的影响
4.4.2 BIO对NF-κB活性的影响
4.4.3 BIO对MAPKs活性的影响
4.5 BIO对细胞凋亡的影响
4.5.1 BIO对细胞凋亡率的影响
4.5.2 BIO对凋亡通路蛋白转录水平的影响
4.5.3 BIO对凋亡通路蛋白的蛋白水平影响
5 讨论
5.1 BIO抑制LPS诱导的小鼠乳腺炎的模型
5.1.1 小鼠乳腺炎模型的构建
5.1.2 BIO浓度的选择
5.2 BIO促炎因子表达的影响
5.3 BIO对IL-10的影响
5.4 BIO对COX-2、MPO表达的影响
5.5 BIO对NF-κB及MAPKs的影响
5.6 BIO对凋亡的影响
6 结论
7 创新与不足
7.1 创新点
7.2 不足之处
7.3 进一步研究的建议/设想
参考文献
在读期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]靛玉红对神经胶质瘤细胞U251的增殖抑制及Bcl-2表达的影响[J]. 张涛,易昊天,王帮华,王泽夏,宁志丰,胡美纯. 湖北科技学院学报(医学版). 2017(06)
[2]中药抗炎作用研究概况[J]. 张昕,魏江存,阙祖亮,陈勇. 中国民族民间医药. 2017(21)
[3]二硫化二砷和靛玉红对骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡及其相关蛋白的影响[J]. 杨秀鹏,周庆兵,麻柔,王洪志,胡晓梅,许勇钢. 疑难病杂志. 2017(11)
[4]牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、BP主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定[J]. 布日额,王金良,吴金花,锡林高娃,陈金龙,孙立杰,王华,朝洛蒙. 中国病原生物学杂志. 2017(07)
[5]奶牛乳腺炎发病原因、危害及防治措施[J]. 许辉堂. 中国畜禽种业. 2017(04)
[6]中药防治奶牛乳腺炎的临床应用及作用机制研究进展[J]. 赖金伦,刘玉辉,陈颖钰,胡长敏,郭爱珍. 中国兽医学报. 2017(02)
[7]中草药治疗奶牛乳腺炎的研究进展[J]. 刘来钦. 中国畜牧兽医文摘. 2016(08)
[8]新生儿无乳链球菌败血症合并脑膜炎12例临床分析[J]. 杨欢欢,李菁. 临床儿科杂志. 2016(03)
[9]IL-1β在痛风性关节炎中的致炎作用及临床意义[J]. 曹建梅,王晓霞,郭景煜,丁旭东. 中华临床医师杂志(电子版). 2016(05)
[10]NOD1/NOD2介导的信号通路在小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的作用[J]. 徐丹丹,杨彬,孙志鹏,武瑞. 中国预防兽医学报. 2015(07)
博士论文
[1]奶牛乳腺炎葡萄球菌种类、毒力基因及抗性基因与耐药性的调查分析[D]. 徐佳.扬州大学 2016
[2]中药复方更年春对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤的保护作用[D]. 王文君.复旦大学 2009
[3]动物乳腺炎的人工诱导及黄芪多糖等对乳腺的保护研究[D]. 钟凯.南京农业大学 2005
硕士论文
[1]6-溴靛玉红-3-肟对山羊乳腺上皮细胞生物学特性的影响[D]. 杨姣.西北农林科技大学 2014
本文编号：3706472
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
1 前言
1.1 研究问题由来
1.2 文献综述
1.2.1 奶牛乳腺炎病原微生物及主要防治方法
1.2.2 奶牛乳腺炎与天然免疫
1.2.3 中药防治奶牛乳腺炎作用机制研究进展
1.2.4 靛玉红及其衍生物的作用研究
2 研究目的与意义
3 材料与方法
3.1 试验材料
3.1.1 试验动物
3.1.2 试剂及耗材
3.1.3 试验仪器
3.1.4 工作液配置
3.2 试验方法
3.2.1 MMECs提取
3.2.2 BIO对MMECs活性影响
3.2.3 BIO抑炎浓度确定
3.2.4 体外模型构建
3.2.5 体内模型的构建
3.2.6 qRT-PCR试验
3.2.7 ELISA检测相关炎性因子
3.2.8 MMECs总蛋白的提取
3.2.9 BCA测定蛋白浓度
3.2.10 相关蛋白westernblot检测
3.2.11 小鼠乳腺炎模型的评价
3.2.12 病理切片制作及观察
3.2.13 组织匀浆上清的制备
3.2.14 试验小鼠血清的处理
3.2.15 试验小鼠MPO检测
3.2.16 流式细胞术
4 结果与分析
4.1 筛选BIO工作浓度
4.1.1 不同浓度BIO对细胞活性影响
4.1.2 BIO最佳抑炎浓度的确定
4.2 BIO抑制LPS诱致的MMECs炎性反应
4.2.1 BIO对COX-2表达的影响
4.2.2 BIO对促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达的影响
4.2.3 BIO对IL-10表达的影响
4.3 BIO抑制LPS对小鼠乳腺的损伤
4.3.1 乳腺大体组织学观察
4.3.2 乳腺病理组织学观察
4.3.3 乳腺损伤评分
4.3.4 乳腺组织中促炎因子的表达
4.3.5 MPO活性检测
4.4 BIO抑制TLR4-NF-κB及TLR4-MAPKs活性
4.4.1 BIO对TLR4的影响
4.4.2 BIO对NF-κB活性的影响
4.4.3 BIO对MAPKs活性的影响
4.5 BIO对细胞凋亡的影响
4.5.1 BIO对细胞凋亡率的影响
4.5.2 BIO对凋亡通路蛋白转录水平的影响
4.5.3 BIO对凋亡通路蛋白的蛋白水平影响
5 讨论
5.1 BIO抑制LPS诱导的小鼠乳腺炎的模型
5.1.1 小鼠乳腺炎模型的构建
5.1.2 BIO浓度的选择
5.2 BIO促炎因子表达的影响
5.3 BIO对IL-10的影响
5.4 BIO对COX-2、MPO表达的影响
5.5 BIO对NF-κB及MAPKs的影响
5.6 BIO对凋亡的影响
6 结论
7 创新与不足
7.1 创新点
7.2 不足之处
7.3 进一步研究的建议/设想
参考文献
在读期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]靛玉红对神经胶质瘤细胞U251的增殖抑制及Bcl-2表达的影响[J]. 张涛,易昊天,王帮华,王泽夏,宁志丰,胡美纯. 湖北科技学院学报(医学版). 2017(06)
[2]中药抗炎作用研究概况[J]. 张昕,魏江存,阙祖亮,陈勇. 中国民族民间医药. 2017(21)
[3]二硫化二砷和靛玉红对骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡及其相关蛋白的影响[J]. 杨秀鹏,周庆兵,麻柔,王洪志,胡晓梅,许勇钢. 疑难病杂志. 2017(11)
[4]牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、BP主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定[J]. 布日额,王金良,吴金花,锡林高娃,陈金龙,孙立杰,王华,朝洛蒙. 中国病原生物学杂志. 2017(07)
[5]奶牛乳腺炎发病原因、危害及防治措施[J]. 许辉堂. 中国畜禽种业. 2017(04)
[6]中药防治奶牛乳腺炎的临床应用及作用机制研究进展[J]. 赖金伦,刘玉辉,陈颖钰,胡长敏,郭爱珍. 中国兽医学报. 2017(02)
[7]中草药治疗奶牛乳腺炎的研究进展[J]. 刘来钦. 中国畜牧兽医文摘. 2016(08)
[8]新生儿无乳链球菌败血症合并脑膜炎12例临床分析[J]. 杨欢欢,李菁. 临床儿科杂志. 2016(03)
[9]IL-1β在痛风性关节炎中的致炎作用及临床意义[J]. 曹建梅,王晓霞,郭景煜,丁旭东. 中华临床医师杂志(电子版). 2016(05)
[10]NOD1/NOD2介导的信号通路在小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的作用[J]. 徐丹丹,杨彬,孙志鹏,武瑞. 中国预防兽医学报. 2015(07)
博士论文
[1]奶牛乳腺炎葡萄球菌种类、毒力基因及抗性基因与耐药性的调查分析[D]. 徐佳.扬州大学 2016
[2]中药复方更年春对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤的保护作用[D]. 王文君.复旦大学 2009
[3]动物乳腺炎的人工诱导及黄芪多糖等对乳腺的保护研究[D]. 钟凯.南京农业大学 2005
硕士论文
[1]6-溴靛玉红-3-肟对山羊乳腺上皮细胞生物学特性的影响[D]. 杨姣.西北农林科技大学 2014
本文编号：3706472
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