鸡传染性支气管炎病毒HH06株全基因序列测定分析及M蛋白多克隆抗体制备
发布时间：2022-11-12 12:58
鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis, IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus, IBV）引起的一种高度接触性、急性呼吸道传染病。目前该病在全世界传播流行广泛,给养禽业造成严重的经济损失。由于该病毒频繁出现基因的突变和重组现象,导致很多不同基因型和血清型毒株的出现,而且这些毒株间的交叉保护性较低,甚至不存在交叉保护性,因此分析IBV基因组的结构特点有助于对传染性支气管炎进行防控。 本研究以IBV SC021202株作为参考毒株设计了20对引物,利用RT-PCR法对IBVHH06株的内部基因组序列进行分段扩增,同时利用RACE Kit试剂盒对基因组的非编码区5’UTR和3’UTR进行扩增,对扩增得到的所有片段进行克隆及序列测定。将测序结果进行拼接,并且利用DNAStar软件和MEGA5.0软件对其全进组及各个基因序列进行生物信息学分析。结果显示IBV HH06株全基因组由27663个核苷酸组成,具有典型IBV基因序列特征。对不同毒株的全基因组及各个基因的序列大小进行比较,发现各毒株间3a、3b、5a、5b和N基...
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 IBV的病原生物学研究
1.1.1 传染性支气管炎病毒的分类
1.1.2 传染性支气管炎病毒的形态
1.1.3 传染性支气管炎病毒的理化及生物特性
1.1.4 传染性性支气管炎病毒国内外流行情况
1.2 IBV的基因组结构
1.2.1 传染性支气管炎病毒结构蛋白生物学功能
1.2.2 传染性支气管炎病毒非结构蛋白生物学功能
1.2.3 传染性支气管炎病毒非编码区生物学功能
1.2.4 IBV的全基因组序列研究进展
1.3 IB的病理变化
1.3.1 传染性支气管炎病毒的致病性
1.3.2 传染性支气管炎病毒的临床症状及病理变化
1.4 IB的诊断和防治
1.4.1 传染性支气管炎的诊断
1.4.2 传染性支气管炎的防治
1.5 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物及SPF鸡胚
2.1.2 毒株、菌株及质粒
2.1.3 试验试剂
2.1.4 试验试剂及培养基的配制
2.1.5 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 病毒的增殖培养
2.2.2 病毒总RNA的提取
2.2.3 HH06株IBV全基因组内部片段的RT-PCR分段扩增
2.2.4 RACE法获取5’末端和3’末端非编码区片段
2.2.5 目的基因的克隆及序列测定
2.2.6 IBV全基因组序列的生物信息学分析
2.2.7 IBV M部分基因的亚克隆及重组表达质粒的构建
2.2.8 重组蛋白的诱导表达及鉴定
2.2.9 重组M1蛋白的多克隆抗体的制备
2.2.10 M1蛋白多克隆抗体的生物学功能检测
2.2.11 数据统计
3 结果与分析
3.1 全基因组RT-PCR分段扩增结果
3.2 重组质粒的鉴定
3.2.1 重组质粒的PCR鉴定
3.2.2 重组质粒的酶切鉴定
3.3 序列测定及拼接
3.4 全基因组序列的生物信息学分析
3.4.1 基因组结构分析
3.4.2 序列同源性分析
3.4.3 系统进化树分析
3.4.4 IBV S基因裂解位点分析比较
3.4.5 重组分析
3.4.6 压力选折分析
3.5 重组表达质粒PET30A-M1和PVAX-M1的构建
3.6 PET-M1蛋白的表达及WESTERN BLOT分析
3.7 M1蛋白多克隆抗体制备及其鉴定
3.7.1 M1蛋白多克隆抗体效价检测和Western blot分析
3.7.2 M1蛋白多克隆抗体IFA检测
3.7.3 病毒感染抑制实验
4 讨论
4.1 全基因组分段扩增
4.2 生物信息学分析
4.3 M蛋白表达分析
4.4 M蛋白生物学功能分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3706412
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 IBV的病原生物学研究
1.1.1 传染性支气管炎病毒的分类
1.1.2 传染性支气管炎病毒的形态
1.1.3 传染性支气管炎病毒的理化及生物特性
1.1.4 传染性性支气管炎病毒国内外流行情况
1.2 IBV的基因组结构
1.2.1 传染性支气管炎病毒结构蛋白生物学功能
1.2.2 传染性支气管炎病毒非结构蛋白生物学功能
1.2.3 传染性支气管炎病毒非编码区生物学功能
1.2.4 IBV的全基因组序列研究进展
1.3 IB的病理变化
1.3.1 传染性支气管炎病毒的致病性
1.3.2 传染性支气管炎病毒的临床症状及病理变化
1.4 IB的诊断和防治
1.4.1 传染性支气管炎的诊断
1.4.2 传染性支气管炎的防治
1.5 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物及SPF鸡胚
2.1.2 毒株、菌株及质粒
2.1.3 试验试剂
2.1.4 试验试剂及培养基的配制
2.1.5 仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 病毒的增殖培养
2.2.2 病毒总RNA的提取
2.2.3 HH06株IBV全基因组内部片段的RT-PCR分段扩增
2.2.4 RACE法获取5’末端和3’末端非编码区片段
2.2.5 目的基因的克隆及序列测定
2.2.6 IBV全基因组序列的生物信息学分析
2.2.7 IBV M部分基因的亚克隆及重组表达质粒的构建
2.2.8 重组蛋白的诱导表达及鉴定
2.2.9 重组M1蛋白的多克隆抗体的制备
2.2.10 M1蛋白多克隆抗体的生物学功能检测
2.2.11 数据统计
3 结果与分析
3.1 全基因组RT-PCR分段扩增结果
3.2 重组质粒的鉴定
3.2.1 重组质粒的PCR鉴定
3.2.2 重组质粒的酶切鉴定
3.3 序列测定及拼接
3.4 全基因组序列的生物信息学分析
3.4.1 基因组结构分析
3.4.2 序列同源性分析
3.4.3 系统进化树分析
3.4.4 IBV S基因裂解位点分析比较
3.4.5 重组分析
3.4.6 压力选折分析
3.5 重组表达质粒PET30A-M1和PVAX-M1的构建
3.6 PET-M1蛋白的表达及WESTERN BLOT分析
3.7 M1蛋白多克隆抗体制备及其鉴定
3.7.1 M1蛋白多克隆抗体效价检测和Western blot分析
3.7.2 M1蛋白多克隆抗体IFA检测
3.7.3 病毒感染抑制实验
4 讨论
4.1 全基因组分段扩增
4.2 生物信息学分析
4.3 M蛋白表达分析
4.4 M蛋白生物学功能分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3706412
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3706412.html
