构建大肠杆菌Nissle 1917无质粒克隆株重组菌及其作为活菌疫苗候选株免疫功能的探析

发布时间：2024-07-10 21:37

　　大肠杆菌 Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917;EcN)是德国医生 Alfred Nissle 于1917年在腹泻流行疫区一名抗腹泻士兵肠道粪便中首次分离出的一株益生菌,由于肠道内存在该株“强大效能且具有拮抗活性”的大肠杆菌,该士兵免受肠道传染病流行区腹泻的侵扰。大肠杆菌Nissle1917是一株无致病性的益生菌,能赋予不同宿主健康益处,且至今并未发现对宿主有已知的害处和不利影响。在德国和其他一些欧洲国家,EcN作为医用Mutaflor(?)的活性成分,在治疗各种肠道疾病中扮演着重要角色。近年来临床应用上,益生菌Nissle1917菌株作为疾病诊治载体被加以改造的报道越来越多,该益生菌已用于疫苗、肿瘤治疗、保健品和诊断制剂等多方面产品的开发与研制。EcNc(EcN cured of its two cryptic plasmids pMUT1 andpMUT2;EcNc)克隆株为大肠杆菌Nissle1917原型野生株改造后去除其胞内两个隐秘性质粒pMUT1和pMUT2,具有比原型亲本株能够携带更多(大)容量的同源或外源基因的特性,该菌株已在本...

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图２．１提高细菌染色体中异源基因表达水平的策略

???—?图２．１提高细菌染色体中异源基因表达水平的策略。（１）增加整合到染色体中的目标异源基因的拷贝数；（２）??选择染色体中高转录水平的位点以整合异源基因；（３）优化靶基因的表迗盒，（Ａ）增加启动子的强度以控制蛋??白质表达，（Ｂ）使用增强子或激活子增加靶基因的转录水平，（Ｃ....

图３．１．质粒提取电泳鉴定图??Ｆｉｇ３．１．?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｏｆ?ｐＩＮＴ－ｔｓ??

３．１．质粒提取电泳鉴定ｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏ化感受态细胞，具体３７°Ｃ振荡培养过夜；培养至细菌ＯＤ６〇〇ｎｍ预冷的１０％甘油重后预冷的１０％甘油重：预冷的１０％甘油体的ＥｃＮ感受态细胞?２５?）ｉＦ，?电阻?２００?□?／ｍｉｎ?，?３０°Ｃ培养１?ｈ....

图３．２．她基因整合入Ｎｉｓｓ丨ｅｌ９１７基因组原理示意图??Ｆｉｇ３．２．?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ＾；?ｇｅｎｅ?ｉｎｔｏ?ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｅ?

?｜??２３２２?＾ＱＨ｜??２Ｄ２？??图３．１．质粒提取电泳鉴定图??Ｆｉｇ３．１．?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏｆｉｌｅｓ?ｏｆ?ｐＩＮＴ－ｔｓ??制备大肠杆菌Ｎｉｓｓｌｅ?１９１７电转化感受态细胞，具体方法如下：从ＬＢ平板上挑取ＥｃＮ单?....

图3.3.g左，若因整合入Nissle1917墓因组的试脸流程图

３．?１．５?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?和?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ??参照文献［７］，过夜培养５２５／ｐ６３ＧＦＰ，?５２５?（阴性对照）和５２５／ｐＧＦＰｍｕｔ３．１?（阳性对照），??将过夜培养的菌液重新转接于５?ｍＬ新鲜ＬＢ中，待ＯＤ６（Ｍ）ｎｍ约为１．０时，各细菌皆调整?....

本文编号：4004769