干扰PTEN基因对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成相关基因的转录及脂肪酸组成的影响

发布时间：2022-12-04 06:24

　　旨在通过RNA干扰技术揭示蛋白酪氨酸磷酸酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN）基因在奶山羊乳腺上皮细胞中对乳脂合成及脂肪酸组成的影响。利用RT-PCR方法扩增到西农萨能奶山羊乳腺组织中PTEN基因（GenBank登录号:MK158074.1）的CDS区,进行序列分析和不同泌乳时期差异转录分析。合成靶向该基因的siRNA,由RT-qPCR结果筛选出有效siRNA,将其转染至奶山羊的乳腺上皮细胞,进一步检测干扰该基因后对脂质合成相关基因转录水平及脂肪酸组成的影响。结果表明:本研究首次克隆到奶山羊（Capra hircus）PTEN基因的CDS区,全长为1 212 bp;经序列比对发现,山羊的PTEN基因核苷酸序列同牛（Bos taurus）、猪（Sus scrofa）和人（Homo sapiens）的相似度分别为99%、98%和97%,编码氨基酸序列相似性均在99%以上;蛋白质结构预测发现:其蛋白不存在跨膜结构域,亚细胞定位于细胞质中,N端具有保守的磷酸酶功能区;该基因在奶山羊泌乳盛期乳腺组织中的转录量... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 样品采集
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 PTEN基因CDS区的克隆
        1.2.2 PTEN基因生物信息学分析
        1.2.3 不同泌乳时期PTEN基因差异转录分析
        1.2.4 siRNA的设计与合成
        1.2.5 细胞的培养与siRNA的转染
        1.2.6 PTEN基因的干扰效果检测及有效siRNA的筛选
        1.2.7 RT-qPCR检测干扰PTEN基因对乳腺脂代谢关键基因的影响
        1.2.8 脂肪酸的提取与检测
2 结 果
    2.1 奶山羊PTEN基因CDS区的克隆
    2.2 奶山羊PTEN基因生物信息学分析
    2.3 不同泌乳时期奶山羊乳腺组织PTEN基因的差异转录分析
    2.4 有效siRNA序列的筛选及干扰效率检测
    2.5 干扰PTEN基因对脂代谢关键基因的RT-qPCR检测影响
    2.6 干扰PTEN基因对脂肪酸组成的影响
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3707756