MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫虫卵后小肠、肝脏差异表达基因的筛选
发布时间：2022-12-04 08:28
细粒棘球蚴病，俗称包虫病，是细粒棘球绦虫的幼虫寄生于人、绵羊等中间宿主所致的一种人畜共患病。绵羊是细粒棘球绦虫最适宜的中间宿主，感染包虫病后生长发育缓慢，其毛、肉和奶的产量均严重受到影响，且患病绵羊肝、肺不能食用。最新调查显示，新疆存栏绵羊4000多万只，饲养数达6000多万只，而包虫病患病率达到50%，这给畜牧业的健康发展以及广大农牧民的生产创收带来严重影响。 本研究前期做了大量的关于绵羊主要组织相容性复合体基因（MHC基因）与包虫病抗性、易感性的相关研究，对新疆三个主要绵羊品种：中国美利奴羊、多浪羊及哈萨克羊MHC-DRB1基因外显子2进行PCR-RFLP检测，成功筛选出哈萨克绵羊与包虫病抗性相关的单倍型MHC-DRB1MvaIbc-SacIIab-Hin1Iab，之后对带有该单倍型的绵羊（抗性组）和不带该单倍型的绵羊（非抗性组）进行人工攻虫，发现抗性组绵羊包虫病发病率比非抗性组绵羊低且差异显著。在此基础上，本文着重对前期筛选的具有包虫病抗性和非抗性的哈萨克绵羊的感染机制及其差异进行分析。 依据前期研究，本研究采用PCR-RFLP方法对250只哈萨克绵羊进行了相应抗...
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
缩略词表
前言
第一篇 文献综述
第一章 家畜棘球蚴病 ( 包虫病 ) 概述
1. 病原学
2. 诊断
2.1 中间宿主（家畜）棘球蚴病的诊断
2.1.1 活体检验
2.1.2 宰后剖检
2.2 终末宿主棘球绦虫成虫的诊断
3. 流行病学
3.1 世界范围的流行
3.2 我国包虫病流行情况
3.3 新疆包虫病流行情况
4.包虫病的防控现状
4.1 世界包虫病的防控现状
4.2 我国包虫病的防控现状
4.3 新疆包虫病的防控现状
5. 小结与展望
第二章 中间宿主感染包虫病的免疫应答研究进展
1. 宿主的先天性免疫
1.1 动物对包虫病的先天性免疫受遗传因素的影响
1.2 人感染包虫病后的先天抗性与易感性受遗传因素的影响
2. 宿主的后天免疫
2.1 宿主感染包虫病后早期免疫应答
2.1.1 原发性感染
2.1.2 继发性感染
2.2 宿主感染包虫病后后期的免疫应答
2.2.1 包囊形成期
2.2.2 宿主抑制包囊的形成
3. 小结与展望
第三章 基因芯片及其在寄生虫病上的研究应用
1. 基因芯片概述
2. 基因芯片在寄生虫病上的研究应用
2.1 基因芯片在疟原虫上的研究进展
2.2 基因芯片在血吸虫病上的研究进展
2.3 基因芯片在包虫病上的研究进展
2.4 基因芯片在绵羊寄生虫病上的研究进展
3. 小结
第二篇 试验研究
第四章 哈萨克绵羊不同MHC基因型个体人工感染细粒棘球绦虫虫卵后早期机体免疫指标的差异分析
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物及病变脏器
1.1.2 试剂与仪器
1.1.3 试剂的配制
1.2 实验方法
1.2.1 哈萨克绵羊MHC-DRB1exon2包虫病抗性、非抗性基因型个体的筛选
1.2.2 实验绵羊人工感染细粒棘球绦虫动物模型的建立
1.2.3 哈萨克绵羊不同MHC-DRB1基因型个体人工感染细粒棘球绦虫后早期机体免疫指标的测定
1.3 数据处理
1.3.1 哈萨克绵羊MHC-DRB1exon2包虫病抗性、非抗性基因型个体的筛选
1.3.2 绵羊人工感染细粒棘球绦虫后早期免疫指标的数据处理及统计分析
2. 实验结果与分析
2.1 MHC-DRB1exon2包虫病抗性、非抗性相关的哈萨克绵羊个体筛选
2.2 人工模型的建立
2.3 哈萨克绵羊不同MHC-DRB1基因型个体人工感染细粒棘球绦虫后早期机体免疫指标差异分析
2.3.1 抗体的差异分析
2.3.2 细胞因子的差异分析
2.3.3 趋化因子的差异分析
3. 讨论
3.1 抗体的差异分析
3.2 细胞因子的差异分析
3.3 趋化因子的差异分析
4. 小结
第五章 MHC不同基因型绵羊感染细粒棘球绦虫后小肠差异表达基因的筛选
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 小肠采集
1.1.3 试剂配制
1.2 方法
1.2.1 组织学切片的制作
1.2.2 免疫组化实验步骤
1.2.3 小肠组织RNA提取
1.2.4 总RNA纯化
1.2.5 基因芯片杂交实验
1.2.6 荧光定量对基因芯片检测结果的验证
2. 结果与分析
2.1 MHC免疫组化切片观测结果
2.2 总RNA提取
2.3 芯片实验
2.3.1 基因芯片质控参数及检出率
2.3.2 差异表达统计
2.3.3 GO富集分析
2.3.4 KEGG代谢通路分析结果
2.4 荧光定量PCR结果统计
2.4.1 荧光定量溶解曲线检测
2.4.2 荧光定量柱状图分析
3 讨论
3.1 免疫组化结果讨论
3.2 基因芯片结果分析讨论
第六章 MHC不同基因型绵羊感染细粒棘球绦虫虫卵后肝脏差异表达基因的筛选
1. 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 肝脏采集
1.2 方法
1.2.1 肝脏组织RNA提取
1.2.2 基因芯片检测
1.2.3 荧光定量PCR对基因芯片检测结果验证
2. 结果与分析
2.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后各时间点的感染结果
2.2 总RNA提取
2.3 基因芯片质控参数及检出率
2.4 绵羊感染细粒棘球绦虫后肝脏组织差异表达基因统计
2.4.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后8周肝脏组织差异表达基因统计
2.4.2 Go富集结果
2.4.3 KEGG结果与分析
2.5 绵羊感染细粒棘球绦虫后24周结果统计与分析
2.5.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后24周差异表达基因统计
2.5.2 Go富集结果
2.5.3 KEGG结果
2.6 荧光定量PCR结果统计
2.6.1 荧光定量溶解曲线检测
2.6.2 荧光定量柱状图分析
3. 讨论
3.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后8周肝脏组织部分差异表达基因分析
3.2 绵羊感染细粒棘球绦虫后24周肝脏组织部分差异表达基因分析
全文结论及创新点
全文结论
创新点
参考文献
附录
附表1 MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫后小肠差异表达基因
附表2 MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫8周后肝脏组织差异表达基因
附表3 MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫后24周肝脏组织差异表达基因
致谢
作者简介
导师评阅表
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆包虫病流行现状与防控对策[J]. 李晓军,王文明,赵莉,石保新,张文宝,闫昊,王光雷,张兰江,张旭,刘志强,努尔,古努尔,米晓云,张壮志. 草食家畜. 2012(04)
[2]两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊细粒棘球六钩蚴侵染期小肠消减文库的构建[J]. 杜鑫立,惠文巧,赵博,郭玉强,马军德,马世俊,木叶沙尔·巴吐尔,刘贤侠,贾斌. 石河子大学学报(自然科学版). 2012(05)
[3]哈萨克绵羊肝包虫病的B超图像分析与诊断[J]. 布威麦尔耶姆·阿卜来提,赵博,惠文巧,刘贤侠,杜鑫立,高树,申红,贾斌. 石河子大学学报(自然科学版). 2012(04)
[4]棘球绦虫分子分类学研究进展[J]. 郝桂英. 中国畜牧兽医. 2012(05)
[5]四川省家畜包虫病流行病学调查报告[J]. 郭莉,阳爱国,张壮志,侯巍,陈冬,文豪,毛光琼,周建玉,吴宣. 中国兽医杂志. 2012(02)
[6]中国新疆地区维吾尔族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究[J]. 林国跃,王彦斌,张和平,武阳,孟伟. 中国组织工程研究. 2012(05)
[7]NK细胞受体及作用机制[J]. 马茜,叶鸣宇,汪洋. 现代免疫学. 2011(06)
[8]胃癌患者外周血微转移指标的检测及意义[J]. 费建东,聂双发,胡晓峰,梁峰,郭飞,安永铸. 中国老年学杂志. 2011(22)
[9]四川省家畜包虫病防治现状及防控对策探讨[J]. 郭莉,阳爱国,侯巍,陈冬,文豪,毛光琼. 草业与畜牧. 2011(11)
[10]人类补体C8结构与功能研究进展[J]. 刘丽莎,钟天鹰. 医学综述. 2011(16)
博士论文
[1]MiR-376a在肝细胞癌发生发展中的作用及其机制研究[D]. 郑永霞.第二军医大学 2012
[2]不同终末宿主对日本血吸虫感染适宜性的差异分析[D]. 杨健美.中国农业科学院 2012
[3]中国美利奴和哈萨克绵羊MHC-DRB1外显子2多态性与包虫病抗性研究[D]. 李仁燕.石河子大学 2011
[4]新疆多浪羊和中国美利奴羊MHC-DRB1、DQB1基因SSCP多态性与包虫病抗性研究[D]. 杜迎春.石河子大学 2010
[5]我国内蒙古东北部三种泡状棘球绦虫感染引起宿主体内基因差异表达的研究[D]. 程喆.厦门大学 2008
[6]中国美利奴羊和多浪羊DRB1、DQB1基因多态性与包虫病抗性关联分析[D]. 申红.石河子大学 2008
[7]IFN-α刺激相关细胞蛋白TIIMPSC和S24v2的功能分析[D]. 刘龙丁.中国协和医科大学 2007
硕士论文
[1]SARS-CoV N蛋白通过AHSG介导对小鼠糖脂代谢的影响[D]. 张春梅.安徽大学 2012
[2]PLAG1和PLA2G2A在肝癌中的异常表达[D]. 洪双双.郑州大学 2011
[3]AHSG基因的原核表达及其在原发性肝癌诊断中的价值[D]. 任鹏飞.郑州大学 2010
[4]泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的分析[D]. 谢文娟.新疆大学 2010
[5]VCL、PPA1、AR在前列腺癌中的表达及相关性研究[D]. 朱利勇.中南大学 2009
[6]细粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表达及抗体制备[D]. 贾如.合肥工业大学 2009
本文编号：3707924
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
缩略词表
前言
第一篇 文献综述
第一章 家畜棘球蚴病 ( 包虫病 ) 概述
1. 病原学
2. 诊断
2.1 中间宿主（家畜）棘球蚴病的诊断
2.1.1 活体检验
2.1.2 宰后剖检
2.2 终末宿主棘球绦虫成虫的诊断
3. 流行病学
3.1 世界范围的流行
3.2 我国包虫病流行情况
3.3 新疆包虫病流行情况
4.包虫病的防控现状
4.1 世界包虫病的防控现状
4.2 我国包虫病的防控现状
4.3 新疆包虫病的防控现状
5. 小结与展望
第二章 中间宿主感染包虫病的免疫应答研究进展
1. 宿主的先天性免疫
1.1 动物对包虫病的先天性免疫受遗传因素的影响
1.2 人感染包虫病后的先天抗性与易感性受遗传因素的影响
2. 宿主的后天免疫
2.1 宿主感染包虫病后早期免疫应答
2.1.1 原发性感染
2.1.2 继发性感染
2.2 宿主感染包虫病后后期的免疫应答
2.2.1 包囊形成期
2.2.2 宿主抑制包囊的形成
3. 小结与展望
第三章 基因芯片及其在寄生虫病上的研究应用
1. 基因芯片概述
2. 基因芯片在寄生虫病上的研究应用
2.1 基因芯片在疟原虫上的研究进展
2.2 基因芯片在血吸虫病上的研究进展
2.3 基因芯片在包虫病上的研究进展
2.4 基因芯片在绵羊寄生虫病上的研究进展
3. 小结
第二篇 试验研究
第四章 哈萨克绵羊不同MHC基因型个体人工感染细粒棘球绦虫虫卵后早期机体免疫指标的差异分析
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物及病变脏器
1.1.2 试剂与仪器
1.1.3 试剂的配制
1.2 实验方法
1.2.1 哈萨克绵羊MHC-DRB1exon2包虫病抗性、非抗性基因型个体的筛选
1.2.2 实验绵羊人工感染细粒棘球绦虫动物模型的建立
1.2.3 哈萨克绵羊不同MHC-DRB1基因型个体人工感染细粒棘球绦虫后早期机体免疫指标的测定
1.3 数据处理
1.3.1 哈萨克绵羊MHC-DRB1exon2包虫病抗性、非抗性基因型个体的筛选
1.3.2 绵羊人工感染细粒棘球绦虫后早期免疫指标的数据处理及统计分析
2. 实验结果与分析
2.1 MHC-DRB1exon2包虫病抗性、非抗性相关的哈萨克绵羊个体筛选
2.2 人工模型的建立
2.3 哈萨克绵羊不同MHC-DRB1基因型个体人工感染细粒棘球绦虫后早期机体免疫指标差异分析
2.3.1 抗体的差异分析
2.3.2 细胞因子的差异分析
2.3.3 趋化因子的差异分析
3. 讨论
3.1 抗体的差异分析
3.2 细胞因子的差异分析
3.3 趋化因子的差异分析
4. 小结
第五章 MHC不同基因型绵羊感染细粒棘球绦虫后小肠差异表达基因的筛选
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 小肠采集
1.1.3 试剂配制
1.2 方法
1.2.1 组织学切片的制作
1.2.2 免疫组化实验步骤
1.2.3 小肠组织RNA提取
1.2.4 总RNA纯化
1.2.5 基因芯片杂交实验
1.2.6 荧光定量对基因芯片检测结果的验证
2. 结果与分析
2.1 MHC免疫组化切片观测结果
2.2 总RNA提取
2.3 芯片实验
2.3.1 基因芯片质控参数及检出率
2.3.2 差异表达统计
2.3.3 GO富集分析
2.3.4 KEGG代谢通路分析结果
2.4 荧光定量PCR结果统计
2.4.1 荧光定量溶解曲线检测
2.4.2 荧光定量柱状图分析
3 讨论
3.1 免疫组化结果讨论
3.2 基因芯片结果分析讨论
第六章 MHC不同基因型绵羊感染细粒棘球绦虫虫卵后肝脏差异表达基因的筛选
1. 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 肝脏采集
1.2 方法
1.2.1 肝脏组织RNA提取
1.2.2 基因芯片检测
1.2.3 荧光定量PCR对基因芯片检测结果验证
2. 结果与分析
2.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后各时间点的感染结果
2.2 总RNA提取
2.3 基因芯片质控参数及检出率
2.4 绵羊感染细粒棘球绦虫后肝脏组织差异表达基因统计
2.4.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后8周肝脏组织差异表达基因统计
2.4.2 Go富集结果
2.4.3 KEGG结果与分析
2.5 绵羊感染细粒棘球绦虫后24周结果统计与分析
2.5.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后24周差异表达基因统计
2.5.2 Go富集结果
2.5.3 KEGG结果
2.6 荧光定量PCR结果统计
2.6.1 荧光定量溶解曲线检测
2.6.2 荧光定量柱状图分析
3. 讨论
3.1 绵羊感染细粒棘球绦虫后8周肝脏组织部分差异表达基因分析
3.2 绵羊感染细粒棘球绦虫后24周肝脏组织部分差异表达基因分析
全文结论及创新点
全文结论
创新点
参考文献
附录
附表1 MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫后小肠差异表达基因
附表2 MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫8周后肝脏组织差异表达基因
附表3 MHC不同基因型哈萨克绵羊人工感染细粒棘球绦虫后24周肝脏组织差异表达基因
致谢
作者简介
导师评阅表
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆包虫病流行现状与防控对策[J]. 李晓军,王文明,赵莉,石保新,张文宝,闫昊,王光雷,张兰江,张旭,刘志强,努尔,古努尔,米晓云,张壮志. 草食家畜. 2012(04)
[2]两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊细粒棘球六钩蚴侵染期小肠消减文库的构建[J]. 杜鑫立,惠文巧,赵博,郭玉强,马军德,马世俊,木叶沙尔·巴吐尔,刘贤侠,贾斌. 石河子大学学报(自然科学版). 2012(05)
[3]哈萨克绵羊肝包虫病的B超图像分析与诊断[J]. 布威麦尔耶姆·阿卜来提,赵博,惠文巧,刘贤侠,杜鑫立,高树,申红,贾斌. 石河子大学学报(自然科学版). 2012(04)
[4]棘球绦虫分子分类学研究进展[J]. 郝桂英. 中国畜牧兽医. 2012(05)
[5]四川省家畜包虫病流行病学调查报告[J]. 郭莉,阳爱国,张壮志,侯巍,陈冬,文豪,毛光琼,周建玉,吴宣. 中国兽医杂志. 2012(02)
[6]中国新疆地区维吾尔族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究[J]. 林国跃,王彦斌,张和平,武阳,孟伟. 中国组织工程研究. 2012(05)
[7]NK细胞受体及作用机制[J]. 马茜,叶鸣宇,汪洋. 现代免疫学. 2011(06)
[8]胃癌患者外周血微转移指标的检测及意义[J]. 费建东,聂双发,胡晓峰,梁峰,郭飞,安永铸. 中国老年学杂志. 2011(22)
[9]四川省家畜包虫病防治现状及防控对策探讨[J]. 郭莉,阳爱国,侯巍,陈冬,文豪,毛光琼. 草业与畜牧. 2011(11)
[10]人类补体C8结构与功能研究进展[J]. 刘丽莎,钟天鹰. 医学综述. 2011(16)
博士论文
[1]MiR-376a在肝细胞癌发生发展中的作用及其机制研究[D]. 郑永霞.第二军医大学 2012
[2]不同终末宿主对日本血吸虫感染适宜性的差异分析[D]. 杨健美.中国农业科学院 2012
[3]中国美利奴和哈萨克绵羊MHC-DRB1外显子2多态性与包虫病抗性研究[D]. 李仁燕.石河子大学 2011
[4]新疆多浪羊和中国美利奴羊MHC-DRB1、DQB1基因SSCP多态性与包虫病抗性研究[D]. 杜迎春.石河子大学 2010
[5]我国内蒙古东北部三种泡状棘球绦虫感染引起宿主体内基因差异表达的研究[D]. 程喆.厦门大学 2008
[6]中国美利奴羊和多浪羊DRB1、DQB1基因多态性与包虫病抗性关联分析[D]. 申红.石河子大学 2008
[7]IFN-α刺激相关细胞蛋白TIIMPSC和S24v2的功能分析[D]. 刘龙丁.中国协和医科大学 2007
硕士论文
[1]SARS-CoV N蛋白通过AHSG介导对小鼠糖脂代谢的影响[D]. 张春梅.安徽大学 2012
[2]PLAG1和PLA2G2A在肝癌中的异常表达[D]. 洪双双.郑州大学 2011
[3]AHSG基因的原核表达及其在原发性肝癌诊断中的价值[D]. 任鹏飞.郑州大学 2010
[4]泡球蚴感染小鼠肝脏基因表达谱的分析[D]. 谢文娟.新疆大学 2010
[5]VCL、PPA1、AR在前列腺癌中的表达及相关性研究[D]. 朱利勇.中南大学 2009
[6]细粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表达及抗体制备[D]. 贾如.合肥工业大学 2009
本文编号：3707924
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