J亚群ALV的分离鉴定及三种方法动态比较分析其在DF-1细胞中的增殖
发布时间：2022-12-04 19:15
禽白血病（Avian Leukosis，AL）是由反转录病毒科禽白血病病毒/肉瘤病毒群病毒（ALV/RSV）引起的，以造血细胞恶性增生为主要病变的一类禽的多种良性和恶性肿瘤性传染病。根据病毒的囊膜蛋白、与病毒宿主特异性相关的gp85蛋白抗原性的差异以及交叉中和试验等，将禽白血病可分为A～J10个亚群，其中只有A、B、C、D、E和J亚群能感染鸡。目前，商品鸡群中以致病性外源性病毒以A亚群和J亚群感染为主，二者流行性最为广泛，且ALV-J较其它亚群的外源性ALVs有更强的水平传播能力。病毒分离鉴定表明，白血病/血管瘤主要是由J亚群禽白血病病毒引起，但也同时有的是由A、B亚群白血病病毒感染引起的。这不仅仅是肉鸡和蛋鸡的问题，这也是我国地方品系鸡（如麻鸡、三黄鸡等）的主要问题。由于经典的A、B、C、D亚群白血病在我国长期得不到关注且无任何净化措施，极有可能已经在地方品系鸡中广泛流行，甚至发生了新的变异产生了新的亚型。 1. SDAU12株ALV-J病毒的分离鉴定 本实验通过接种DF-1细胞，成功的从广州某三黄鸡种鸡场分离到一株外源性ALVSDAU12，测得了其env基因序列，并与其他亚群的...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表 中文摘要 ABSTRACT 1 前言
1.1 禽白血病病毒亚群
1.2 ALV-J 的形态学
1.3 流行病学特点
1.3.1 ALV-J 的宿主范围
1.3.2 ALV-J 的传播途径
1.3.3 临床症状
1.3.4 剖检特点
1.3.5 组织病理学变化
1.3.6 ALV-J 的新流行特点
1.4 鉴别诊断
1.5 ALV-J 的分子生物学特性
1.6 ALV-J 的易变性
1.7 病毒的研究进展及其危害
1.7.1 ALV-J 的研究进展
1.7.2 实验室现有的检测技术
1.7.3 ALV-J 的主要危害
1.8 本研究的意义 2 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 病料来源
2.1.2 实验动物
2.1.3 DF-1 细胞
2.1.4 ALV-J 特异性单抗
2.1.5 FITC
2.1.6 ELISA 检测试剂盒
2.1.7 培养基配制
2.1.8 PCR 引物
2.1.9 仪器与其他试剂
2.1.10 相关溶液的配制
2.2 试验方法
2.2.1 病毒的分离与增殖培养
2.2.2 细胞上清 p27 的检测
2.2.3 外源性病毒的分离
2.2.4 间接免疫荧光实验
2.2.5 前病毒基因组 cDNA 的提取
2.2.6 PCR 产物的克隆及测序
2.2.7 利用 ELISA、FA 及 IFA 法对新分离病毒在 DF1 细胞上的增殖进行动态比较分析 3 实验结果
3.1 ALVP27 检测结果
3.2 IFA 检测结果
3.3 PCR 检测结果
3.4 SDAU12 株 ENV 基因测序结果
3.5 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列
3.6 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列分析
3.6.1 SDAU12 毒株与其他亚群参考株 ALVgp85 氨基酸序列同源性比较分析
3.6.2 SDAU12 毒株 gp85 高变区的氨基酸变异
3.6.3 SDAU12 毒株与其他亚群参考株 ALVgp37 氨基酸序列同源性比较分析
3.7 ELISA 检测结果
3.8 FA 检测结果
3.9 IFA 检测结果
3.10 三种试验结果的比较分析 4 讨论
4.1 禽白血病病毒亚群的划分标准
4.2 该地方品系鸡中禽白血病病毒的来源
4.3 病毒的分离鉴定及序列分析
4.4 ELISA、FA 和 IFA 三种试验方法的比较分析
4.5 禽白血病的防控 5 结论 参考文献 致谢 攻读学位期间发表论文情况及著作
【参考文献】：
期刊论文
[1]淋巴细胞性J亚群禽白血病病理学观察[J]. 邓桦,武云飞,卢玉葵,王政富,杨鸿,马春全. 畜牧兽医学报. 2011(12)
[2]禽白血病的实验室诊断技术[J]. 焦静波,王建军,杨建文. 畜牧与饲料科学. 2009(Z2)
[3]商品蛋鸡血管瘤和髓细胞瘤型J亚群禽白血病的分子诊断及病理学研究[J]. 吴晓平,钱琨,沈海玉,王平平,邵红霞,金文杰,秦爱建. 中国动物传染病学报. 2009(03)
[4]J亚型禽白血病病毒分子生物学特点和诊断方法研究进展[J]. 贺锋,赵玉军. 畜牧兽医杂志. 2007(06)
[5]应用PCR从AA肉种鸡鸡胚和1日龄雏鸡体内检测出CIAV和ALV-J[J]. 尹逊河,孙晴,李同树,徐淑敏,衣婷婷. 中国兽医学报. 2007(05)
[6]黄羽肉鸡J亚群白血病病毒的分子生物学特性和致病性[J]. 李艳,崔治中,孙淑红. 病毒学报. 2007(03)
[7]蛋鸡中发现J亚群白血病与网状内皮增生症自然混合感染[J]. 成子强,张玲娟,刘杰,刘思当,赵振华,张利,崔治中. 中国兽医学报. 2006(06)
[8]REV和ALV-J共感染鸡病毒血症及抗体反应的相互影响[J]. 孟珊珊,崔治中,孙淑红. 中国兽医学报. 2006(04)
[9]应用组织芯片免疫组化法检测ALV-J[J]. 张玲娟,刘杰,成子强,王桂花,刁秀国,朱国. 中国预防兽医学报. 2006(04)
[10]J亚群禽白血病病毒（ALV-J）ELISA检测方法的建立[J]. 叶建强,秦爱建,邵红霞,金文杰,刘岳龙. 中国兽医学报. 2006(03)
博士论文
[1]荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D]. 张在平.内蒙古农业大学 2010
[2]禽白血病病毒J亚群（ALV-J）内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D]. 成子强.内蒙古农业大学 2002
[3]禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D]. 秦爱建.扬州大学 1999
硕士论文
[1]鸡混合感染J亚群白血病病毒与网状内皮增殖病病毒免疫抑制机理研究[D]. 商营利.山东农业大学 2003
本文编号：3708837
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表 中文摘要 ABSTRACT 1 前言
1.1 禽白血病病毒亚群
1.2 ALV-J 的形态学
1.3 流行病学特点
1.3.1 ALV-J 的宿主范围
1.3.2 ALV-J 的传播途径
1.3.3 临床症状
1.3.4 剖检特点
1.3.5 组织病理学变化
1.3.6 ALV-J 的新流行特点
1.4 鉴别诊断
1.5 ALV-J 的分子生物学特性
1.6 ALV-J 的易变性
1.7 病毒的研究进展及其危害
1.7.1 ALV-J 的研究进展
1.7.2 实验室现有的检测技术
1.7.3 ALV-J 的主要危害
1.8 本研究的意义 2 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 病料来源
2.1.2 实验动物
2.1.3 DF-1 细胞
2.1.4 ALV-J 特异性单抗
2.1.5 FITC
2.1.6 ELISA 检测试剂盒
2.1.7 培养基配制
2.1.8 PCR 引物
2.1.9 仪器与其他试剂
2.1.10 相关溶液的配制
2.2 试验方法
2.2.1 病毒的分离与增殖培养
2.2.2 细胞上清 p27 的检测
2.2.3 外源性病毒的分离
2.2.4 间接免疫荧光实验
2.2.5 前病毒基因组 cDNA 的提取
2.2.6 PCR 产物的克隆及测序
2.2.7 利用 ELISA、FA 及 IFA 法对新分离病毒在 DF1 细胞上的增殖进行动态比较分析 3 实验结果
3.1 ALVP27 检测结果
3.2 IFA 检测结果
3.3 PCR 检测结果
3.4 SDAU12 株 ENV 基因测序结果
3.5 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列
3.6 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列分析
3.6.1 SDAU12 毒株与其他亚群参考株 ALVgp85 氨基酸序列同源性比较分析
3.6.2 SDAU12 毒株 gp85 高变区的氨基酸变异
3.6.3 SDAU12 毒株与其他亚群参考株 ALVgp37 氨基酸序列同源性比较分析
3.7 ELISA 检测结果
3.8 FA 检测结果
3.9 IFA 检测结果
3.10 三种试验结果的比较分析 4 讨论
4.1 禽白血病病毒亚群的划分标准
4.2 该地方品系鸡中禽白血病病毒的来源
4.3 病毒的分离鉴定及序列分析
4.4 ELISA、FA 和 IFA 三种试验方法的比较分析
4.5 禽白血病的防控 5 结论 参考文献 致谢 攻读学位期间发表论文情况及著作
【参考文献】：
期刊论文
[1]淋巴细胞性J亚群禽白血病病理学观察[J]. 邓桦,武云飞,卢玉葵,王政富,杨鸿,马春全. 畜牧兽医学报. 2011(12)
[2]禽白血病的实验室诊断技术[J]. 焦静波,王建军,杨建文. 畜牧与饲料科学. 2009(Z2)
[3]商品蛋鸡血管瘤和髓细胞瘤型J亚群禽白血病的分子诊断及病理学研究[J]. 吴晓平,钱琨,沈海玉,王平平,邵红霞,金文杰,秦爱建. 中国动物传染病学报. 2009(03)
[4]J亚型禽白血病病毒分子生物学特点和诊断方法研究进展[J]. 贺锋,赵玉军. 畜牧兽医杂志. 2007(06)
[5]应用PCR从AA肉种鸡鸡胚和1日龄雏鸡体内检测出CIAV和ALV-J[J]. 尹逊河,孙晴,李同树,徐淑敏,衣婷婷. 中国兽医学报. 2007(05)
[6]黄羽肉鸡J亚群白血病病毒的分子生物学特性和致病性[J]. 李艳,崔治中,孙淑红. 病毒学报. 2007(03)
[7]蛋鸡中发现J亚群白血病与网状内皮增生症自然混合感染[J]. 成子强,张玲娟,刘杰,刘思当,赵振华,张利,崔治中. 中国兽医学报. 2006(06)
[8]REV和ALV-J共感染鸡病毒血症及抗体反应的相互影响[J]. 孟珊珊,崔治中,孙淑红. 中国兽医学报. 2006(04)
[9]应用组织芯片免疫组化法检测ALV-J[J]. 张玲娟,刘杰,成子强,王桂花,刁秀国,朱国. 中国预防兽医学报. 2006(04)
[10]J亚群禽白血病病毒（ALV-J）ELISA检测方法的建立[J]. 叶建强,秦爱建,邵红霞,金文杰,刘岳龙. 中国兽医学报. 2006(03)
博士论文
[1]荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D]. 张在平.内蒙古农业大学 2010
[2]禽白血病病毒J亚群（ALV-J）内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D]. 成子强.内蒙古农业大学 2002
[3]禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D]. 秦爱建.扬州大学 1999
硕士论文
[1]鸡混合感染J亚群白血病病毒与网状内皮增殖病病毒免疫抑制机理研究[D]. 商营利.山东农业大学 2003
本文编号：3708837
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