干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化

发布时间：2022-12-06 18:02

　　旨在克隆山羊Smad3的基础上,明确其组织和细胞表达谱,最终阐明干扰Smad3基因对山羊肌内和皮下脂肪细胞分化的影响。本研究选用5只体况良好的1周龄简州大耳羊,空腹24 h后屠宰并采集相应组织和细胞进行试验。利用RT-PCR技术克隆山羊Smad3基因cDNA区序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, qPCR）技术检测Smad3基因的组织和细胞时序表达水平;并且合成靶向Smad3的siRNA,采用油红O染色从形态学上明确干扰Smad3对山羊前体脂肪细胞成脂分化的影响,利用qPCR检测干扰Smad3对脂肪细胞分化标志基因C/EBPα、C/EBPβ、LPL、SREBP1、AP2、PPARγ、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF6、KLF7、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15以及Smads相关基因Smad2、Smad4、Smad7和TGF-β1基因mRNA表达水平的影响,探讨可能的作用机制。结果,获得山羊Smad3基因1 449 bp,其中CDS区序列为1 278 bp,编码425个氨基酸;Smad3在山羊各组织中具... 

【文章页数】：15 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验试剂
    1.3 试验方法
        1.3.1 Smad3基因克隆和生物信息学分析
        1.3.2 Smad3的组织和细胞时序表达
        1.3.3 干扰Smad3对山羊脂肪细胞分化的影响
            1.3.3.1 干扰效率的检测:
            1.3.3.2 形态学检测(油红O染色)干扰Smad3对山羊脂肪细胞分化的影响:
            1.3.3.3 干扰Smad3对分化标志基因及Smads和TGF-β1的影响:
        1.3.4 统计分析
2 结 果
    2.1 山羊Smad3基因的克隆与生物信息学分析
    2.2 山羊Smad3基因的组织和细胞表达模式
    2.3 干扰Smad3对山羊脂肪细胞分化的影响
        2.3.1 干扰效率检测
        2.3.2 山羊肌内和皮下脂肪细胞的形态学检测结果
    2.4 干扰山羊Smad3对分化标志基因表达的影响
    2.5 干扰Smad3对山羊脂肪细胞成脂分化的影响
3 讨 论
    3.1 Smad3基因克隆和组织表达
    3.2 Smad3对山羊脂肪细胞分化的影响
    3.3 Smad3基因对脂肪细胞分化可能的作用机制
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化过程中内参基因的表达稳定性分析[J]. 许晴,林森,朱江江,王永,林亚秋.  畜牧兽医学报. 2018(05)
[2]转录因子KLF8基因结构及其功能研究进展[J]. 徐嘉威,贺花,张静,雷初朝,陈宏,黄永震.  中国生物工程杂志. 2018(04)
[3]KLF4、KLF7在大鼠网膜脂肪组织中的表达与炎症的相关性研究[J]. 王翠喆,哈晓丹,李伟,许彭,顾雅娟,王淼,谢建新,张君.  免疫学杂志. 2016(03)
[4]纤维化胰腺组织中TGF—β1、Smad3、Smad7的表达及意义[J]. 马松林,赵秋,龚勇,王渝,杨芳.  世界华人消化杂志. 2007(02)
[5]小鼠Smad3基因的克隆及其在小鼠组织中的表达[J]. 程萱,徐晓玲,沈善祥,周江,邓初夏,杨晓.  中国生物化学与分子生物学报. 2002(01)



本文编号：3711378