绵羊肺腺瘤病毒真核表达质粒pcDNA3.1（+）/exJSRV-env引起体内和体外细胞发生的转化

发布时间：2022-12-06 23:04

　　本试验旨在进一步全面研究绵羊肺腺瘤病毒（JSRV）囊膜蛋白ENV的功能。使用本试验室已构建好的真核表达质粒pcDNA3.1（+）/exJSRV-env转染NIH3T3细胞,并将此NIH3T3细胞接种到裸鼠体内;重组质粒经尾静脉注射到幼龄BALB/c小鼠体内。结果显示,真核表达质粒pcDNA3.1（+）/exJSRV-env引起NIH3T3细胞发生转化,转染细胞接触抑制性消失,并形成大量的转化灶;pcDNA3.1（+）/exJSRV-env转染的NIH3T3细胞接种裸鼠使裸鼠致瘤,即引起NIH3T3细胞发生癌变。JSRVenv基因在小鼠体内表达,肝脏细胞出现大面积弥散性坏死,脾脏白髓严重坏死,心肌细胞明显颗粒样变性,肺间质细胞增生,肾小管上皮细胞轻度颗粒样变性。结果表明,绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白可以引起鼠NIH3T3细胞发生转化和癌变,使小鼠各脏器出现不同程度的病变。本试验为进一步探索JSRV ENV的致瘤机制奠定基础。 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物及处理
        1.1.2主要试剂
    1.2 真核表达质粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env的鉴定
    1.3 细胞转化和鉴定
    1.4裸鼠致瘤实验
    1.5 pcDNA3.1(+)/exJSRV-env在小鼠体内表达
    1.6 RT-PCR检测env基因mRNA的表达
    1.7 病理组织学H.E染色
2 结果
    2.1 真核表达质粒pcDNA3.1(+)/JSRV-env的鉴定
    2.2 pcDNA3.1(+)/exJSRV-env转染NIH3T3细胞
        2.2.1 pcDNA3.1(+)/exJSRV-env转染NIH-3T3细胞后目的基因的检测
        2.2.2 JSRV-env基因引起NIH3T3细胞恶性转化
    2.3 JSRV-env基因引起NIH3T3细胞发生癌变
    2.4 JSRV-ENV蛋白在小鼠体内不同脏器中的mRNA的表达检测
    2.5 JSRV-ENV蛋白引起小鼠体内不同脏器发生变化的检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究[J]. 张宇飞,石晶,刘淑英.  畜牧兽医学报. 2015(11)
[2]绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究[J]. 张宇飞,刘月,王专家,孙晓林,刘淑英.  病毒学报. 2014(03)
[3]绵羊肺腺瘤病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 王金良,于新友,沈志强,孙翠平,唐娜.  中国兽医学报. 2013(11)
[4]pcDNA3.1（+）/exJSRV-env重组质粒的构建及其瞬时转染293T细胞[J]. 张宇飞,刘月,张亚坤,孙晓林,刘淑英.  畜牧与兽医. 2012(S1)



本文编号：3711791