BAMBI通过Wnt/β-catenin信号通路抑制猪前体脂肪细胞分化

发布时间：2022-12-07 00:07

　　近年来，肥胖已成为全球关注的热点问题，它逐渐成为威胁人们健康的杀手之一，是造成II型糖尿病及心脑血管疾病的主要原因。脂肪沉积是由于脂肪细胞体积的增大或脂肪细胞数目的增多，即脂肪细胞的分化和成熟，是涉及多种调控因子作用的复杂过程。BAMBI是最近发现的调控脂肪形成的因子。BAMBI是含有260个氨基酸的横跨膜糖蛋白，因其与TGF超家族I型受体的结构相似，又称其为TGF超家族的伪受体。大量的资料显示，BAMBI参与机体多个生理及病理过程的调控。此外，在癌症上的研究也显示BAMBI与Wnt/β-catenin信号通路等多个信号通路有密切的联系，在成脂过程的研究也初步证实BAMBI可能抑制脂肪细胞分化，但具体的作用机制尚不明确。因此，本实验利用干扰及超表达的手段，减少或增加BAMBI的表达，通过油红O染色、实时定量PCR（real-time qPCR）、蛋白印迹（western blot）等技术，阐明BAMBI在猪前体脂肪细胞分化过程的作用机制，得到的研究结果如下： 1. BAMBI基因在3日龄及180日龄猪各组织中均有表达，其中在肾脏中的表达量最高，在脂肪组织中表达量适中；BAMBI在... 

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 BAMBI 概述
    1.1 BAMBI 的发现
    1.2 BAMBI 的结构
    1.3 BAMBI 与疾病
    1.4 BAMBI 与组织发育
    1.5 BAMBI 的作用机制
    1.6 BAMBI 对脂肪细胞分化作用的初步研究
第二章 Wnt/β‐catenin 信号通路与脂肪细胞分化
    2.1 Wnt/β‐catenin 信号通路简介
        2.1.1 Wnts
        2.1.2 Frizzled
        2.1.3 LRP5/6
        2.1.4 Dishevelled
        2.1.5 β‐catenin
        2.1.6 GSK‐3
        2.1.7 Axin
        2.1.8 APC
        2.1.9 TCF/LEF
    2.2 Wnt/β‐catenin 信号通路的作用机制
    2.3 Wnt/β‐catenin 信号通路与脂肪形成
前言
第三章 猪 BAMBI 基因的组织及时序表达模式
    3.1 材料
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 猪组织样采集
        3.2.2 猪前体脂肪细胞分离培养及诱导分化
        3.2.3 RNA 提取
        3.2.4 RNA 的反转录
        3.2.5 real‐time qPCR 检测 BAMBI mRNA 表达
        3.2.6 细胞总蛋白提取
        3.2.7 Western blotting
    3.3 数据分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 3 日龄与 180 日龄大白猪中 BAMBI 的组织表达谱
        3.4.2 BAMBI 在体内及体外条件下猪前体脂肪细胞分化过程中的表达模式
        3.4.3 BAMBI 在猪前体脂肪细胞分化过程的表达情况
    3.5 讨论
第四章 干扰 BAMBI 促进猪前体脂肪细胞分化
    4.1 材料
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂
    4.2 方法
        4.2.1 猪 pLentiH1‐BAMBI shRNA 的构建
        4.2.2 慢病毒的包装
        4.2.3 慢病毒滴度的测定
        4.2.4 慢病毒侵染猪前体脂肪细胞
        4.2.5 猪前体脂肪细胞分离培养及诱导分化
        4.2.6 油红 O 染色及提取
        4.2.7 细胞总 RNA 及蛋白提取
        4.2.8 Real‐time qPCR
        4.2.9 Western blotting
    4.3 数据分析
    4.4 结果分析
        4.4.1 BAMBI 慢病毒干扰载体的构建
        4.4.2 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒的包装与侵染猪前体脂肪细胞
        4.4.3 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒干扰效率检测
        4.4.4 干扰 BAMBI 后促进猪前体脂肪细胞分化
    4.5 讨论
第五章 超表达 BAMBI 抑制猪前体脂肪细胞分化
    5.1 材料
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 Ad‐BAMBI 超表达载体的构建
        5.2.2 Ad‐BAMBI 超表达载体的包装、扩繁
        5.2.3 腺病毒滴度测定
        5.2.4 腺病毒侵染猪前体脂肪细胞
        5.2.5 猪前体脂肪细胞分离培养基诱导分化
        5.2.6 油红 O 染色及提取
        5.2.7 细胞总 RNA 及蛋白提取
        5.2.8 Real‐time qPCR
        5.2.9 Western blotting
    5.3 数据分析
    5.4 结果分析
        5.4.1 BAMBI 重组腺病毒的构建与鉴定
        5.4.2 BAMBI 重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定
        5.4.3 Ad‐BAMBI 侵染猪前体脂肪细胞及超表达效率检测
        5.4.4 超表达 BAMBI 抑制猪前体脂肪细胞分化
    5.5 讨论
第六章 BAMBI 与 Wnt/β‐catenin 信号通路在成脂过程的作用机制
    6.1 材料
        6.1.1 实验材料
        6.1.2 实验试剂
    6.2 实验方法
        6.2.1 慢病毒侵染猪前体脂肪细胞
        6.2.2 腺病毒侵染猪前体脂肪细胞
        6.2.3 油红 O 染色及提取
        6.2.4 细胞总 RNA 及蛋白提取
        6.2.5 细胞核蛋白提取
        6.2.6 Real‐time qPCR
        6.2.7 Western blotting
    6.3 数据分析
    6.4 结果分析
        6.4.1 BAMBI 促进 Wnt/β‐catenin 信号通路抑制猪前体脂肪细胞分化
        6.4.2 不同浓度 LiCl 对猪前体脂肪细胞分化的影响
        6.4.3 超表达 BAMBI 促进 LiCl 对猪前体脂肪细胞分化的抑制作用
    6.5 讨论
结论
创新点
需进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]LiCl激活经典Wnt信号通路诱导猪骨骼肌卫星细胞向慢肌分化[J]. 杨秋梅,刘月光,沈清武,史新娥,杨公社.  中国畜牧杂志. 2012(11)
[2]慢病毒载体介导的RNA干扰Akt2表达抑制猪前体脂肪细胞分化[J]. 王平,熊燕,杨公社,沈清武,庞卫军.  中国生物化学与分子生物学报. 2012(01)
[3]Prognostic significance of BMP and activin membrane-bound inhibitor in colorectal cancer[J]. Nozomi Togo,Susumu Ohwada,Shinji Sakurai,Hiroyuki Toya,Ichiro Sakamoto,Tatsuya Yamada,Tetsuhiro Nakano,Ken Muroya,Izumi Takeyoshi,Takashi Nakajima,Takashi Sekiya,Yusuke Yamazumi,Tsutomu Nakamura,Tetsu Akiyama.  World Journal of Gastroenterology. 2008(31)



本文编号：3711870